Снип основания зданий и сооружений: СП 22.13330.2016 Основания зданий и сооружений Актуализированная редакция СНиП 2.02.01-83 (с Изменениями N 1, 2)

Изменение № 1 к СП 22.13330.2016 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений»

Перед направлением электронного обращения в Минстрой России, пожалуйста, ознакомьтесь с изложенными ниже правилами работы данного интерактивного сервиса.

1. К рассмотрению принимаются электронные обращения в сфере компетенции Минстроя России, заполненные в соответствии с прилагаемой формой.

2. В электронном обращении может содержаться заявление, жалоба, предложение или запрос.

3. Электронные обращения, направленные через официальный Интернет-портал Минстроя России, поступают на рассмотрение в отдел по работе с обращениями граждан. Министерство обеспечивает объективное, всестороннее и своевременное рассмотрение обращений. Рассмотрение электронных обращений осуществляется бесплатно.

4.

В соответствии с Федеральным законом от 02.05.2006 г. N 59-ФЗ «О порядке рассмотрения обращений граждан Российской Федерации» электронные обращения регистрируются в течение трёх дней и направляются в зависимости от содержания в структурные подразделения Министерства. Обращение рассматривается в течение 30 дней со дня регистрации. Электронное обращение, содержащее вопросы, решение которых не входит в компетенцию Минстроя России, направляется в течение семи дней со дня регистрации в соответствующий орган или соответствующему должностному лицу, в компетенцию которых входит решение поставленных в обращении вопросов, с уведомлением об этом гражданина, направившего обращение.

5. Электронное обращение не рассматривается при:
— отсутствии фамилии и имени заявителя;

— указании неполного или недостоверного почтового адреса;
— наличии в тексте нецензурных или оскорбительных выражений;
— наличии в тексте угрозы жизни, здоровью и имуществу должностного лица, а также членов его семьи;
— использовании при наборе текста некириллической раскладки клавиатуры или только заглавных букв;
— отсутствии в тексте знаков препинания, наличии непонятных сокращений;
— наличии в тексте вопроса, на который заявителю уже давался письменный ответ по существу в связи с ранее направленными обращениями.

6. Ответ заявителю обращения направляется по почтовому адресу, указанному при заполнении формы.

7. При рассмотрении обращения не допускается разглашение сведений, содержащихся в обращении, а также сведений, касающихся частной жизни гражданина, без его согласия. Информация о персональных данных заявителей хранится и обрабатывается с соблюдением требований российского законодательства о персональных данных.

8. Обращения, поступившие через сайт, обобщаются и представляются руководству Министерства для информации. На наиболее часто задаваемые вопросы периодически публикуются ответы в разделах «для жителей» и «для специалистов»

СП 22.13330.2016 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений» — DWGFORMAT

Область применения

Настоящий свод правил распространяется на проектирование оснований вновь строящихся и реконструируемых зданий и сооружений в котлованах, траншеях и открытых выработках.

Примечание — Далее вместо термина «здания и сооружения» используется термин «сооружения», в число которых входят также подземные сооружения.

Настоящий свод правил не распространяется на проектирование оснований гидротехнических сооружений, дорог, аэродромных покрытий, сооружений, возводимых на вечномерзлых грунтах, а также оснований глубоких опор и фундаментов машин с динамическими нагрузками.

Содержание

1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Термины и определения
4 Общие положения
5 Проектирование оснований
5.1 Общие указания
5.2 Нагрузки и воздействия, учитываемые в расчетах оснований.
5.3 Нормативные и расчетные значения характеристик грунтов
5.4 Подземные воды
5.5 Глубина заложения фундаментов
5.6 Расчет оснований по деформациям
5.7 Расчет оснований по несущей способности
5.8 Особенности проектирования оснований при реконструкции сооружений

5. 9 Мероприятия по уменьшению деформаций оснований и влияния их на сооружения
6 Особенности проектирования оснований сооружений, возводимых на специфических грунтах и в особых условиях
6.1 Просадочные грунты
6.2 Набухающие грунты
6.3 Засоленные грунты
6.4 Органоминеральные и органические грунты
6.5 Элювиальные грунты
6.6 Насыпные грунты
6.7 Намывные грунты
6.8 Пучинистые грунты
6.9 Закрепленные грунты
6.10 Армированные грунты
6.11 Особенности проектирования оснований сооружений, возводимых на подрабатываемых территориях
6.12 Особенности проектирования оснований сооружений, возводимых на закарстованных территориях
6.13 Особенности проектирования оснований сооружений, возводимых
в сейсмических районах
6.14 Особенности проектирования оснований сооружений, возводимых вблизи источников динамических воздействий
7 Особенности проектирования оснований опор воздушных линий электропередачи
8 Особенности проектирования оснований и фундаментов малоэтажных зданий
9 Особенности проектирования оснований подземных частей сооружений и геотехнический прогноз
10 Особенности проектирования оснований высотных зданий
11 Проектирование водопонижения
12 Геотехнический мониторинг
13 Экологические требования при проектировании оснований
Приложение А (рекомендуемое) Нормативные значения прочностных и деформационных характеристик грунтов
Приложение Б (рекомендуемое) Расчетные сопротивления грунтов оснований
Приложение В (рекомендуемое) Определение осадки основания фундамента методом линейно деформируемого слоя
Приложение Г (рекомендуемое) Предельные деформации основания фундаментов объектов нового строительства

Приложение Д (обязательное) Категории состояния существующих сооружений
Приложение Е (рекомендуемое) Предельные деформации основания фундаментов реконструируемых сооружений
Приложение Ж (рекомендуемое) Физико-механические характеристики органоминеральных и органических грунтов
Приложение И (рекомендуемое) Физико-механические характеристики элювиальных грунтов
Приложение К (обязательное) Предельные дополнительные деформации оснований фундаментов сооружений окружающей застройки, расположенных в зоне влияния нового строительства или реконструкции
Приложение Л (обязательное) Контролируемые параметры при геотехническом мониторинге
Приложение М (справочное) Основные буквенные обозначения

---

Поделиться в социальных сетях

Ещё записи из рубрики  «»

СНиП 2.

02.01-83 (1995) ОСНОВАНИЯ ЗДАНИЙ И СООРУЖЕНИЙ — Раздел 2

КартыСНиП 2.01.02-85 (1991)Противопожарные нормыСНиП 2.01.07-85 (с изм. 1 1993) НАГРУЗКИ И ВОЗДЕЙСТВИЯСНиП 2.11.01-85 (1991) складские зданияСНиП 2.01.09-91 ЗДАНИЯ И СООРУЖЕНИЯ НА ПОДРАБАТЫВАЕМЫХ ТЕРРИТОРИЯХ И ПРОСАДОЧНЫХ ГРУНТАХСНиП 2.01.14-83 (1985) ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАСЧЕТНЫХ ГИДРОЛОГИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИКСНиП 2.01.15-90СНиП 2.01.51-90 ИНЖЕНЕРНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ ГРАЖДАНСКОЙ ОБОРОНЫ СНиП 2.01.53-84СНиП 2.02.01-83 (1995) ОСНОВАНИЯ ЗДАНИЙ И СООРУЖЕНИЙСНиП 2.02.02-85 основания гидротехнических сооруженийСНиП 2.11.02-87 (с изм. 1 2000) ХолодильникиСНиП 2.02.03-85 (1995) свайные фундаментыСНиП 2.02.04-88 (1990) ОСНОВАНИЯ И ФУНДАМЕНТЫ НА ВЕЧНОМЕРЗЛЫХ ГРУНТАХСНиП 2.02.05-87 фундаменты машин с динамическими нагрузкамиСНиП 2.03.01-84 (1989, с изм 1988, 1 1989, 2 1992) бетонные и железобетонные конструкцииСНиП 2.03.13-88 ПОЛЫСНиП 2.03.02-86 бетонные и железобетонные конструкции из плотного силикатного бетонаСНиП 2.09.

03-85 сооружения промышленных предприятийСНиП 2.03.03-85 армоцементные конструкцииСНиП 2.09.04-87 (2000) административные и бытовые зданияСНиП 2.03.04-84СНиП 2.10.02-84СНиП 2.10.03-84СНиП 2.03.06-85 (1988, с изм. 1988 ) алюминиевые конструкцииСНиП 2.10.04-85 (с изм. 1 2000) Теплицы и парникиСНиП 2.03.09-85 (1988, с изм. 1988) асбесоцементные конструкцииСНиП 2.10.05-85СНиП 2.03.11-85 асбесоцементные конструкцииСНиП 2.04.01-85 (2000) ВНУТРЕННИЙ ВОДОПРОВОД И КАНАЛИЗАЦИЯ ЗДАНИЙСНиП 2.11.03-93 склады нефти и нефтепродуктов. противопожарные нормыСНиП 2.04.02-84 (с изм. 1 1986, попр. 2000) водоснабжение наружные сети и сооруженияСНиП 2.11.06-91 склады лесных материалов. противопожарные нормы проектированияСНиП 2.04.03-85 (с изм. 1986) канализация. наружные сети и сооруженияСНиП II-3-79 (1998) строительная теплотехникаСНиП 2.04.05-91 (2000) отопление, вентиляция и кондиционированиеСНиП II-7-81 (1995 с изм .4 1997) строительство в сейсмических районахСНиП 2.04.07-86 (2000) ТЕПЛОВЫЕ СЕТИСНиП II-11-77 (1985) Защитные сооружения гражданской обороныСНиП 2. 04.08-87 (1999) ГАЗОСНАБЖЕНИЕСНиП II-12-77 ЗАЩИТА ОТ ШУМАСНиП 2.04.09-84 (с изм. 1 1997) пожарная автоматика зданий и сооружений СНиП II-22-81 (1995) каменные и армокаменные конструкцииСНиП 2.04.12-86 расчет на прочность стальных трубопроводовСНиП II-23-81 (1990) Стальные конструкцииСНиП 2.04.14-88 (1998) тепловая изоляция оборудования и трубопроводовСНиП II-25-80 (с изм 1988) Деревянные конструкцииСНиП 2.05.02-85 (1997) автомобильные дорогиСНиП II-26-76 (1979) Кровли СНиП 2.05.03-84 (с изм. 1 1991) МОСТЫ И ТРУБЫСНиП II-35-76 (с изм. 1978, 1 1998) котельные установкиСНиП 2.05.06-85 (2000) МАГИСТРАЛЬНЫЕ ТРУБОПРОВОДЫСНиП 2.05.07-91 (1996, с изм. 1 1996) ПРОМЫШЛЕННЫЙ ТРАНСПОРТСНиП II-58-75 (1976 с изм 1978 и 1979) ЭЛЕКТРОСТАНЦИИ ТЕПЛОВЫЕСНиП 2.05.09-90 трамвайные и троллейбусные линииСНиП II-89-80 (1994) генеральные планы промышленных предприятийСНиП 2.05.11-83СНиП II-94-80 подземные горные выработкиСНиП 2.05.13-90СНиП II-97-76 (с изм 1 1985 и 2 1990) Генеральные планы сельскохозяйственных предприятийСНиП 2. 06.01-86СНиП II-108-78СНиП 2.06.03-85 МЕЛИОРАТИВНЫЕ СИСТЕМЫ И СООРУЖЕНИЯСНиП 2.06.04-82СНиП 2.06.05-84 (1990) плотины из грунтовых материаловСНиП 2.06.07-87СНиП 2.06.06-85 (с изм. 1 1987) плотины бетонные и железобетонныеСНиП 2.06.08-87 бетонные и железобетонные конструкции гидротехнических сооруженийСНиП 2.06.09-84 Туннели гидротехническиеСНиП 2.06.14-85 (с изм 1 1989) защита горных выработок от подземных и поверхностных водСНиП 2.06.15-85 инженерная защита территории от затопления и подтопленияСНиП 2.07.01-89 (2000) планировка и застройка городских и сельских поселенийСНиП 2.08.01-89 жилые здания (1999) СНиП 2.09.02-85 (1991, с изм. 3 1994) ПРОИЗВОДСТВЕННЫЕ ЗДАНИЯ

СП 22.13330.2016 Основания зданий и сооружений

СП 22.13330.2016 Основания зданий и сооружений.

Утверждён обязательным к применению согласно Приказу Минстроя России №970/пр от 16 декабря 2019 г.

Дата введения 1 июля 2017 г.

Перечень изменений:

В целях повышения уровня надежности и безопасности зданий и сооружений (механическая безопасность, безопасность при опасных природных процессах и явлениях и (или) техногенных воздействиях, безопасный уровень воздействия зданий и сооружений на окружающую среду и пр. ) в соответствии с ФЗ «Технический регламент о безопасности зданий и сооружений», обеспечения соответствия разработанных норм современным требованиям в Свод правил внесены следующие основные изменения:

1. Дополнен раздел «Термины и определения»;
2. Уточнены требования п.5.1.11 в части допустимости использования упрощенных расчетных схем сооружения с эквивалентной жесткостью этажа;
3. Введен п.5.1.11а, уточняющий области применения контактных моделей;
4. Введен п.5.1.13а о методике верификации расчетных моделей;
5. Уточнены требования п.5.2.1 в части условий, при которых нагрузки на основание допускается определять без учета их перераспределения надфундаментной конструкцией;
6. Уточнены требования п.5.6.6 с учетом введенного п. 5.1.11а;
7. Уточнены требования п. 5.6.40 в части определения порового давления в глинистых грунтах;
8. Уточнены требования п. 5.6.41 в части ограничения глубины сжимаемой толщи при наличии в основании малосжимаемых грунтов;
9. Дополнены пп. 5.9.1(д), 5.9.3(а), 5.9.7, 6.1.27(а,б), 6.6.15 методом уплотнения грунтов основания ступенчато возрастающей нагрузкой сваевдавливающими установками СВУ;
10. Введен п.6.6.16а о требованиях к проекту основания, уплотняемого сваевдавливающими установками СВУ;
11. Уточнен п. 2 Примечаний к п. 6.12.10 в части определения категории технического состояния здания и сооружений, расположенных на карстоопасных территориях;
12. Дополнен п. 9.12 требованиями по учеты усилий в конструкциях ограждения котлованов от температурно-климатических воздействий;
13. Введен п. 4 Примечаний к п. 9.35 о необходимости учета температурных деформации распорных конструкций, связанные с сезонным понижением температуры при геотехническом прогнозе;
14. Дополнен п. 10.30 указаниями о возможности использования упрощенных расчетных схем сооружения с эквивалентной жесткостью этажа.
15. Разработано и включено Приложение М «Методика определения эквивалентной жесткости каркаса здания»;
16. Приложение М переименовано в Приложение Н;
17. Проведены редакционные изменения в отношении всех разделов с исправлением опечаток.

Скачать СП 22.13330.2016 в формате pdf можно по ссылке

Приказ Минстроя России от 16.12.2016 N 970/пр (ред. от 10.02.2017) «Об утверждении СП 22.13330 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений»

МИНИСТЕРСТВО СТРОИТЕЛЬСТВА И ЖИЛИЩНО-КОММУНАЛЬНОГО
ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРИКАЗ
от 16 декабря 2016 г. N 970/пр
ОБ УТВЕРЖДЕНИИ СП 22.13330 «СНИП 2.02.01-83*
ОСНОВАНИЯ ЗДАНИЙ И СООРУЖЕНИЙ»
В соответствии с Правилами разработки, утверждения, опубликования, изменения и отмены сводов правил, утвержденными постановлением Правительства Российской Федерации от 1 июля 2016 г. N 624, подпунктом 5.2.9 пункта 5 Положения о Министерстве строительства и жилищно-коммунального хозяйства Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 18 ноября 2013 г. N 1038, пунктом 210 Плана разработки и утверждения сводов правил и актуализации ранее утвержденных сводов правил, строительных норм и правил на 2015 г. и плановый период до 2017 г., утвержденного приказом Министерства строительства и жилищно-коммунального хозяйства Российской Федерации от 30 июня 2015 г. N 470/пр с изменениями, внесенными приказом Министерства строительства и жилищно-коммунального хозяйства Российской Федерации от 14 сентября 2015 г. N 659/пр, приказываю:
1. Утвердить и ввести в действие через 6 месяцев со дня издания настоящего приказа прилагаемый СП 22.13330 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений».
2. С момента введения в действие СП 22.13330 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений» признать не подлежащим применению СП 22.13330.2011 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений», утвержденный приказом Министерства регионального развития Российской Федерации от 28 декабря 2010 г. N 823, за исключением пунктов СП 22.13330.2011 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений», включенных в Перечень национальных стандартов и сводов правил (частей таких стандартов и сводов правил), в результате применения которых на обязательной основе обеспечивается соблюдение требований Федерального закона «Технический регламент о безопасности зданий и сооружений», утвержденный постановлением Правительства Российской Федерации от 26 декабря 2014 г. N 1521 (далее — Перечень), до внесения соответствующих изменений в Перечень.
3. Департаменту градостроительной деятельности и архитектуры в течение 15 дней со дня издания приказа направить утвержденный СП 22.13330 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений» на регистрацию в национальный орган Российской Федерации по стандартизации.
4. Департаменту градостроительной деятельности и архитектуры обеспечить опубликование на официальном сайте Минстроя России в информационно-телекоммуникационной сети «Интернет» текста утвержденного СП 22.13330 «СНиП 2.02.01-83* Основания зданий и сооружений» в электронно-цифровой форме в течение 10 дней со дня регистрации свода правил национальным органом Российской Федерации по стандартизации.
5. Контроль за исполнением настоящего приказа возложить на заместителя Министра строительства и жилищно-коммунального хозяйства Российской Федерации Х.Д. Мавлиярова.
И.о. Министра
Е.О.СИЭРРА
 Журнал строительной инженерии — Elsevier 
 The  Journal of Building Engineering  (JOBE) — это междисциплинарный журнал, охватывающий все аспекты науки и техники, касающиеся всего жизненного цикла искусственной среды; от этапа проектирования до строительства, эксплуатации, производительности, технического обслуживания и его ухудшения. Только РАБОТА …
 Читать далее
 The  Journal of Building Engineering  (JOBE) — это междисциплинарный журнал, охватывающий все аспекты науки и техники, касающиеся всего жизненного цикла искусственной среды; от этапа проектирования до строительства, эксплуатации, производительности, технического обслуживания и его ухудшения.JOBE публикует только статьи, в которых четко демонстрируется значительная научная новизна.
 Журнал будет охватывать, помимо прочего, следующие темы:
 • Энергия в зданиях и управление ими 
 • Техническое обслуживание зданий 
 • Строительные материалы 
 • Патология здания 
 • Характеристики здания 
 • Модернизация зданий и энергоэффективность 
 • Архитектурный дизайн с учетом климатических требований 
 • Покрытия и облицовка 
 • Компьютерное проектирование и моделирование 
 • Строительные технологии и инженерия 
 • Потребление энергии и управление 
 • Энергоэффективность (оболочка здания и система) 
 • Оценка жизненного цикла 
 • Экологический инженерный проект 
 • Проектирование фасадов и ограждающих конструкций 
 • Управление и эксплуатация помещений 
 • Техника пожарной безопасности 
 • Здоровье и благополучие 
 • Системы отопления, вентиляции и кондиционирования 
 • Качество окружающей среды в помещении (акустическое, визуальное, термическое, влажность, качество воздуха) 
 • Осмотр и диагностика 
 • Интеллектуальный здания (эксплуатация и управление) 
 • Возобновляемая энергия y приложений (солнечная энергия, дневной свет, ветер) 
 • Модернизация и реконструкция существующих зданий 
 • Прогноз срока службы 
 • Усиление и восстановление 
 • Структурный анализ 
 • Оценка конструкции 
 • Проектирование конструкции 
 • Мониторинг состояния конструкций 
 • Структурные испытания 
 • Устойчивое проектирование и эксплуатация 
 • Устойчивое строительство 
 • Полная стоимость эксплуатации
 Технические примечания к проектам, кодексам и стандартам также приветствуются.
  Пожалуйста, не связывайтесь с редакторами для проверки статуса вашей рукописи, поскольку они обрабатывают большое количество представленных материалов и, к сожалению, не могут ответить на все запросы статуса.  Пожалуйста, используйте для этой цели опцию «Отслеживать отправку». Если ваша статья была отправлена ​​на рецензирование, редакторы должны дождаться, пока приглашенные рецензенты согласятся рецензировать статью. После того, как рецензенты любезно согласились рецензировать документ, их просят предоставить свои рецензии в течение 21 дня, однако, к сожалению, возникают задержки, а это не всегда возможно.Редакторы знают о задержанных рукописях, и рецензентам задержанных статей рассылаются напоминания с просьбой загрузить свои рецензии при первой же возможности. Как только редакторы получат необходимое количество рецензий, они смогут быстро принять решение по рукописи.
 Авторы могут быть уверены, что редакторы используют все свои ресурсы, чтобы сделать процесс редактирования и публикации максимально быстрым.
  Обязанности автора:  Принятие рукописи для публикации в журнале подразумевает понимание того, что автор, по запросу, выполнит обязательство по внесению своего опыта в рецензирование рукописей других лиц.Авторам также предлагается предложить 3 независимых рецензентов вместе с их  институциональными адресами электронной почты . Названные возможные судьи не должны быть из их собственного учреждения, а некоторые должны быть из разных стран.
 Скрыть полную цель и объем
 (PDF) Сейсмостойкость зданий с подвесными конструкциями 
 Международная конференция по строительству, архитектуре и техносферной безопасности
 IOP Conf. Серия: Материаловедение и инженерия 687 (2019) 033042
 IOP Publishing
 doi: 10.1088 / 1757-899X / 687/3/033042
 5
 4. Здания с подвесными конструкциями могут быть как малоэтажными, так и высотными. Здесь высота этажа
 может быть разной.
 Список литературы
 [1] СП 14.13330. 2018 Строительство в сейсмоопасных районах. Доработанная редакция СНиП II-7-81 * (Москва:
 Минстроя России) с. 117
 [2] Шуллер В. 1979 Конструкции высотных зданий, Перевод с английского Килимник Л.Ш., ред.
 Казина Г.А. ( Москва: Стройиздат) с. 248
 [3] Корчинский И.Л., Гриль А.А., Чернявский И.З., Попов И.В., Каплан В.Е., Фридбург В.И. 1975
 Подвесное здание (SU СССР 477227)
 [4] Чануквадзе Г.Ш., Марджанишвили М.А., Микабадзе Ю.Г. 1978 г. Подвесное сейсмостойкое здание
 (SU СССР 613065)
 [5] Чануквадзе Г.Ш., Марджанишвили М.А., Микабадзе Ю.Г. 1980 г. Многоэтажное землетрясение
 стойкое с подвесными перекрытиями (SU СССР 791871)
 6] Складнев Н.Н. 1994 Высотные дома с жестким стволом и перекрытиями, подвешенными на
 предварительно натянутых оттяжках, предназначенные для сейсмических стран (Москва) стр. 18
 [7] Остроменский П.И., Никифоров И.С., Болотов А.С. здание подвесного типа Патент
 RU 2186183
 [8] Григорьева И. И. 1979 Исследование колебаний подвесного потолка при сейсмическом воздействии т. 8
 (М .: ВНИИИС Госстроя СССР) с. 18–21
 [9] Строительство бизнес-центра в Антверпене http: // www.debalansvanbraem.be/braem_over_bouwen/
 de_bp_building_in_antwerpen
 [10] Подвешивание здания в воздухе http://www.innovation-creativity.com/hanging-a-building-in-air.html
 [11] Allen E, Zalewski W. 1998 Shaping Structures (Йорк: John Wiley & Sons) стр. 416
 [12] 40 лет «4 цилиндра» — головной офис BMW в Мюнхене https:
 //www.press.bmwgroup.com/russia/article/ деталь / T0143990RU
 [13] Калугина-Паблос К.Н. 2014 Подвесные конструкции («Город в городе.Парящий ») (Москва:
 Наука, образование и экспериментальный дизайн: Книга рефератов) стр. 402–403
 [14] Челеби М., Улусой Х.С., Наката Н. 2016 Отзывы о высотном здании в Лос-Анджелесе, Калифорния,
 по данным локальных и удаленных землетрясений, том 32 (США: Earthquake Engineering
 Research Institute with Allen Press) 3 1821–1843
 [15] Махмуд Х. , Чулахват A 2015 Реакция строительных систем с подвесными плитами перекрытия при
 динамических воздействиях vol 104 (Amsterdam: Elsevier) pp 155–173
 [16] Маклакова Т.Г. 2006 Высотные здания.Градостроительные и архитектурно-конструктивные вопросы проектирования
 (М .: Издательство АСВ) с. 160
 [17] Белаш Т.А., Рыбаков П.Л. 2015 Здания с подвесными конструкциями в сейсмоопасных районах (Санкт-
 Петербург: ПГУПС) с 31 –37
 [18] Белаш Т.А., Рыбаков П.Л. 2016 Эффективное использование конструктивных систем зданий с подвесными конструкциями
 (М .: Землетрясение. Безопасность конструкций) 4 33–36
 [19] Белаш Т.А., Рыбаков П.Л. 2016 Строительство с подвесными конструкциями в сейсмоопасных районах (Санкт-
 Петербург: СПбПУ) 5 (65) 17–26
 [20] Уздин А.М., Елизаров С.В., Белаш Т.А. 2012 Сейсмостойкое проектирование транспортных зданий
 и сооружений: учебно-методические пособия для студентов железнодорожного транспорта (Москва: Учебный
 центр обучения на железных дорогах) с 500
 Разработка нормативов строительства зданий в РФ 
 Разработка современных и эффективных стандартов строительства зданий сегодня является одной из важнейших задач, способствующих устойчивому функционированию и развитию строительной отрасли в России. В настоящее время на федеральном уровне ведется работа по созданию обязательных сводов правил, строительных норм и других документов, направленных на энергосбережение и внедрение стандартов зеленого строительства.
 Однако одним из важнейших приоритетов в этой области является создание систем стандартизации на базе Национальной ассоциации строителей (НОСТРОЙ). Данная система создана в рамках федерального законодательства и ГОСТ 1.4-2004 «Стандартизация в Российской Федерации.Организации по стандартизации. Основные положения.»
 Система стандартизации
 должна обеспечивать возможность строителей СРО устанавливать на основе стандартов НОСТРОЙ единые требования к зданиям и сооружениям (включая входящие в их структуру сети и системное инженерное обеспечение), конструкциям зданий, материалам и изделиям, требованиям. процессу проектирования (включая исследования), строительства, монтажа, ввода в эксплуатацию, эксплуатации и утилизации (снос), а также требований к выполнению работ или оказанию услуг в области строительства.
 В настоящее время приняты и рекомендованы к применению следующие стандарты НОСТРОЙ: НОСТРОЙ 1.0 «Основные принципы» и НОСТРОЙ 1.1 «Порядок разработки, утверждения, регистрации, учета, изменения и отмены».
 «Подготовлены перечни документов в области стандартизации (строительных норм и стандартов) и национальных стандартов (ГОСТ, ГОСТ Р), используемых для соблюдения правил в обязательном и добровольном порядке. Таким образом, все работы по обновлению обязательных документов заявки должны завершить до 01.07.2012.
 Программа стандартизации НОСТРОЙ предполагает разработку 91 стандарта. Главный приоритет в этом случае — обеспечение нормативно-правовой базы и надзор за строительными работами, которые дают право на работу. Программа состоит из пяти разделов: стандарты и рекомендации НОСТРОЙ, свод правил (СНиП-строительные правила и нормы), межгосударственные строительные нормы и правила, Еврокоды, научные исследования.
 Программа
 на 2011 год включала работы по обновлению строительных норм и правил 16 и подготовку экспертных заключений и комплектов документов для утверждения Минрегионом России обновленных строительных норм и правил 35. Также помимо программы, включающей разработку и подготовку экспертных заключений на утверждение Минрегионразвития, 11 межгосударственных строительных норм, обеспечивающих законодательную базу Технического регламента «О безопасности зданий и сооружений, строительных материалов и изделий». ЕврАзЭС и Таможенный союз.
 В настоящее время разрабатывается Программа стандартизации документов на 2011-2012 годы, охватывающая более 100 видов работ в следующих, наиболее широко используемых областях, влияющих на безопасность эксплуатации и объектов капитального строительства:
 • работы по организации строительства, подготовительные работы;
 • свайные работы и затирка швов;
 • устройство и монтаж сборных железобетонных и железобетонных конструкций;
 • монтаж металлоконструкций;
 • установка деревянных и каменных конструкций;
 • устройство кровли;
 • фасадные работы;
 • внутренние инженерные системы и оборудование зданий и сооружений;
 • устройство автомобильных дорог.
 Учитывая, что в соответствии с Уставом НОСТРОЙ должны быть предусмотрены поддержка и поощрение инновационной деятельности, а также продвижение последних достижений науки и техники, отечественного и международного опыта в области строительства, проектные дополнения к Программе стандартизации национального Ассоциация включила разработку стандартов и руководств для обеспечения применения:
 • инновационные технологии в сборно-монолитных железобетонных конструкциях;
 • инновационные материалы (неметаллический композит) в строительстве бетонных и геотехнических сооружений.
 Также разработаны обновленные версии строительных норм и правил (СНиП), не входящие в перечень обязательных для применения документов, но нуждающиеся в срочной актуализации и необходимые для строительных работ:
 • СНиП 3.05.0185 «Внутренняя сантехника»;
 • СНиП 3.03.01-87 «Несущие и ограждающие конструкции»;
 • СНиП II23-81 «Металлоконструкции. Строительные нормы».
 НОСТРОЙ согласовывает появляющиеся стандарты с заинтересованными сторонами (соответствующими комитетами и региональными координаторами) внутри союза, при необходимости — с другими национальными ассоциациями и органами, изучает стандарты в Техническом комитете по стандартизации ТК 465 «Строительство» и / или другом соответствующем ТК и публикует проект. стандарты на своем официальном сайте.
 В настоящее время разработаны и прошли все необходимые стадии обсуждения и экспертизы 3 стандарта НОСТРОЙ:
 • НОСТРОЙ СРТ «Коммунальные сооружения внутри зданий и сооружений. Монтаж и пусконаладочные работы испарительных конденсаторных агрегатов для кондиционирования воздуха жилых зданий. Общие технические требования»
; • СТО НОСТРОЙ «Коммунальные здания и сооружения внутри. Вентиляция и кондиционирование. Испытания и наладка систем вентиляции и кондиционирования»;
 • СРТ НОСТРОЙ «Коммунальные здания и сооружения внутри.Аппарат для отопления, горячей и холодной воды. Критерии качества.
 Позже в систему стандартизации будут включены альбомы с проектными и техническими решениями, предварительными стандартами и другими документами, необходимыми для продвижения инновационных проектов, распространения передовых технологий и оптимизации работы сотрудников НОСТРОЙ.
  Гармонизация с европейской системой технического регулирования. 
 По поручению Минрегиона России НОСТРОЙ совместно с национальными ассоциациями изыскателей и проектировщиков подготовил проект комплексной программы гармонизации российских и европейских нормативных требований в строительной отрасли.
 Программа разработана на основе европейского руководства L «Внедрение и использование Еврокодов» и предусматривает принятие европейских стандартов в качестве национальных стандартов и кодексов практики с национальными приложениями, проведение адаптации (тестовых сравнительных исследований) решений, сертификации программного обеспечения. , сравнительный анализ применения стандартов и затрат на строительство, организация обучения специалистов, персонала и студентов и т. д. Программа в настоящее время активно реализуется при координации и финансовой поддержке национальных ассоциаций.
 В 2010-2011 гг. Проводились переводческие работы, редактирование, сравнительный анализ российских норм и разработка национальных приложений 40 частей Еврокодов (из 58 существующих). Одним из основных требований к будущему 3-му поколению Еврокодов является упрощение самих документов с точки зрения их понимания более широкого круга пользователей, а именно:
 • улучшить понимание требований, установленных в Еврокодах;
 • максимально возможное исключение альтернативных требований;
 • исключение тех требований, которые широко не применяются
 Таким образом, в России создана профессиональная система стандартизации в области строительства — система стандартизации НОСТРОЙ, которая позволит:
 • предоставить доказательную базу Федерального закона №384-ФЗ «Технический регламент о безопасности зданий и сооружений», а также доказательную базу Технического регламента «О безопасности зданий, строительных материалов и изделий» ЕврАзЭС и таможни. Союз;
 • обеспечивает нормативную базу и мониторинг строительных работ, которые дают право на работу;
 • профессиональные организации в области строительства устанавливают собственные стандарты, основанные на современных технологиях и материалах, и контролируют их выполнение;
 • Обеспечить наличие нормативной базы, необходимой для объективной оценки соответствия в системе добровольной оценки соответствия НОСТРОЙ;
 • обеспечить разумную гармонизацию с международными и европейскими стандартами и внедрение современных технологий в строительстве;
 • повышение качества и конкурентоспособности строительных предприятий, а также результатов строительной деятельности, обеспечение экономии ресурсов.
 Глава 3, Компостирующие конструкции — Earth-Kind® Landscaping Earth-Kind® Landscaping 
 Тип конструкции или метод, который вы выбираете для приготовления компоста, на самом деле зависит от личных предпочтений. Если вы любите делать это самостоятельно, вы можете построить свою собственную конструкцию, используя такие материалы, как дерево, сварная проволока, бетонные блоки или деревянные поддоны. Сборные готовые бункеры и устройства для поворота барабанов также можно приобрести в местных магазинах строительных материалов и в садовых центрах или по каталогам по почте.Многие мусорные ведра изготавливаются из переработанного пластика. Если эстетика вызывает беспокойство, вы можете купить мусорное ведро промышленного производства.
 С другой стороны, домашнее компостирование не обязательно должно производиться в конструкции. Это можно сделать, просто поместив органические материалы в кучу или кучу на заднем дворе. Это также можно сделать в яме, вырытой в земле, или просто в полиэтиленовых пакетах на заднем дворе. Еще один косвенный способ компостирования — просто добавить органические вещества, такие как осенние листья и увядающие однолетние растения, в садовую почву, как это делают фермеры в конце посевного сезона.
 В этой главе мы обсудим пять методов компостирования с использованием самых разнообразных конструкций: блоки выдержки, блоки поворота, кучи, компостирование ямы и компостирование пластиковых пакетов. Конкретные планы также предусмотрены для самых разных структур.
 Держатели 
 Подразделения для хранения — это контейнеры, бункеры или конструкции для удержания органических материалов во время процесса компостирования. Переносные блоки могут быть изготовлены из легких материалов, таких как сварная проволока или аппаратная ткань, проволочная сетка на деревянном каркасе или старые деревянные поддоны, связанные вместе, в то время как постоянные блоки могут быть изготовлены из ландшафтной древесины, бетонных блоков или кирпичей.
 Также доступны промышленные холдинговые блоки. Удерживающие устройства отличаются от токарных устройств тем, что органические материалы внутри удерживающих устройств обычно не обрабатываются, в то время как токарные устройства созданы для облегчения поворота.
 Независимо от типа конструкции, которую вы выберете, убедитесь, что она хорошо вентилируется для хорошей циркуляции воздуха в компостируемых материалах. Кроме того, идеальный размер конструкции составляет 3 фута X 3 фута X 3 фута. Если контейнер выше или шире 3 футов, аэрация становится проблемой, и процесс компостирования происходит медленнее.
 Ниже приведены инструкции для самостоятельного создания некоторых из часто используемых холдинговых единиц. Не стесняйтесь изменять планы в соответствии с вашими целями.
 Держатель для проволочной сетки 
 Удерживающий элемент из проволочной сетки — один из самых недорогих и простых в сборке. Его можно сделать из оцинкованной проволочной сетки (неоцинкованная проволока долго не прослужит) или аппаратной ткани. Бункер с проволочной сеткой также позволяет легко переворачивать органические материалы. Просто поднимите проволоку, отложите ее в сторону и используйте садовую вилку или лопату, чтобы зачерпнуть органику обратно в кучу, одновременно собирая готовый компост со дна.
 Материалы 
 10 футов длиной 36 дюймов шириной 1 дюйм оцинкованной куриной проволоки или 10 футов длины аппаратной ткани шириной 1/2 дюйма
 проволока для стяжек
 три или четыре деревянных или металлических столбика высотой 4 фута (для мусорного ведра с проволочной сеткой)
 Инструменты 
 Сверхпрочные ножницы для проволоки или оловянные ножницы
 Плоскогубцы
 Молоток (для решетчатого ящика)
 Напильник металлический (для мусорной корзины)
 Рабочие перчатки
 Процедура строительства с использованием проволочной сетки 
 Отогните 3–4 дюйма проволоки на каждом конце отрезанной детали, чтобы получить прочный, чистый край, который не будет задирать и не заедать, и который будет легко защелкиваться.
 Поставьте проволоку в круг и установите ее на место для компостной кучи.
 Нарежьте толстую проволоку на куски для стяжки. Соедините концы проволочной сетки с помощью хомутов с помощью плоскогубцев.
 Расставьте деревянные или металлические столбы вокруг внутренней части проволочного круга. Плотно прижимая столбы к проволоке, вбейте их в землю, чтобы обеспечить поддержку.
 Порядок строительства с использованием аппаратной ткани 
 Обрежьте концы аппаратной ткани так, чтобы провода были на одном уровне с поперечной проволокой, чтобы избежать краев, которые могут поцарапать руки.Слегка подпилите каждую проволоку вдоль обрезанного края, чтобы обеспечить безопасное обращение при открытии и закрытии контейнера.
 Согните ткань для оборудования в круг и поставьте ее на место для компостной кучи.
 Нарежьте толстую проволоку на куски для стяжки. Соедините концы аппаратной ткани проволочными стяжками с помощью плоскогубцев.
 Держатель деревянных поддонов 
 Старые деревянные поддоны — отличное место для хранения органических материалов. Поддоны, бывшие в употреблении, часто можно бесплатно получить на местных предприятиях.
 Материалы 
 Четыре деревянных поддона (пять поддонов, если вам нужно дно в устройстве).
 Гвозди
 Трос для тюков
 Инструменты 
 Пила
 Кувалда
 Молоток-гвоздодер
 Рабочие перчатки
 Порядок строительства 
 Прибейте или скрепите четыре поддона вместе, чтобы получилась четырехсторонняя корзина.
 Пятый поддон можно использовать в качестве основания, чтобы позволить большему количеству воздуха попадать в штабель и повысить устойчивость бункера.
 Крепление для бетонных блоков 
 Удерживающее устройство для бетонных блоков прочное, долговечное и легкодоступное. Если бетонные блоки должны быть приобретены, удерживающее устройство из бетонных блоков может быть немного дороже, чем удерживающее устройство из проволочной сетки или снежного ограждения.
 Материалы 
 примерно сорок шесть бетонных блоков для первого бункера
 (необязательно) около тридцати двух блоков для второго бункера
 деревянные или металлические стойки для стабилизации бункера
 рабочие перчатки
 Порядок строительства с использованием бетонных блоков 
 Поместите пять бетонных блоков в ряд вдоль земли на участке компостирования, оставив около 1/2 дюйма между каждым блоком для впуска воздуха.
 Поместите четыре бетонных блока в другой ряд вдоль земли перпендикулярно первому ряду и на одном конце первого ряда, образуя квадратный угол, оставьте около 1/2 дюйма между каждым блоком.
 Таким же образом поместите четыре бетонных блока на противоположном конце первого ряда, чтобы сформировать трехстороннее ограждение.
 Добавьте второй слой блоков, расположив их в шахматном порядке для повышения устойчивости и оставив примерно 1/2 дюйма между каждым блоком. На каждой из трех стен ограждения должен быть слой из четырех бетонных блоков.
 Добавьте третий слой блоков, снова расположив их в шахматном порядке для повышения устойчивости, с пятью блоками в задней части корпуса и тремя блоками с каждой стороны.
 Последний и верхний слой должен иметь четыре блока сзади и по три с каждой стороны.
 Чтобы сделать бункер более устойчивым, проденьте в отверстия в блоках деревянные или металлические столбы.
 (Необязательно) Если вы хотите сократить время компостирования, постройте второй контейнер рядом с первым, чтобы отходы в одном могли созревать, пока вы добавляете отходы в другой.Используйте одну боковую стенку первого бункера, так что вам нужно построить только две дополнительные стены.
 Компостер для мусора 
 Компост из мусорного ведра недорогой и простой в сборке. Однако недостатком компостера для мусора является то, что материалы внутри устройства трудно перевернуть.
 Материалы 
 мусорное ведро с крышкой
 грубые опилки, солома или щепа
 Инструменты 
 сверло
 вилка, лопата или устройство для ворошения компоста
 рабочие перчатки
 Порядок строительства с использованием мусорного бака 
 Просверлите три ряда отверстий на расстоянии 4–6 дюймов по сторонам мусорного бака. Затем просверлите несколько отверстий в основании мусорного ведра. Отверстия обеспечивают движение воздуха и отвод лишней влаги.
 Положите на дно банки 2–3 дюйма сухих опилок, соломы или щепы, чтобы впитать лишнюю влагу и дать компосту стечь.
 Станки токарные 
 Как следует из названия, поворотные устройства предназначены для периодического перемешивания органических веществ в процессе компостирования. Чаще всего используются токарные устройства с тремя бункерами и бочкообразные компостеры.Как и блоки выдержки, каждый бункер поворотного блока с тремя бункерами должен иметь размер приблизительно 3 фута X 3 фута X 3 фута, чтобы обеспечить хорошую аэрацию компостируемой органики.
 Ниже приведены подробные планы самостоятельного строительства некоторых часто используемых токарных станков. Опять же, не стесняйтесь изменять планы в соответствии с вашими целями. Источники нескольких произведенных единиц перечислены в приложении.
 Трехканальный токарный станок по дереву и проволоке 
 Если позволяет пространство, и если вам нужно больше места для годовой поставки органических материалов, рекомендуется устройство поворота с тремя бункерами. Он предоставляет больше места для компостирования, чем одна единица. Органику можно переключать от одного юнита к другому, причем каждый из трех юнитов находится на разных стадиях. Другими словами, контейнер 1 можно использовать для свежих поступающих органических материалов, контейнер 2 — для полуфабриката компоста, а контейнер 3 — для готового компоста. Материалы периодически переворачиваются внутри каждого бункера и перемещаются из одного бункера в другой, когда они достигают желаемого уровня разложения.
 Материалы 
 Пиломатериалы 2 X 4, обработанные под давлением длиной 4–12 футов
 Пиломатериалы 2 X 4 длиной 2–10 футов, обработанные под давлением
 Строительный брус 2 X 4 длиной 1–10 футов
 Пиломатериалы 2 X 6 длиной 1–16 футов
 Пиломатериалы 1 X 6 длиной 6–8 футов
 1–22 фута аппаратной ткани шириной 36 дюймов и шириной 1/2 дюйма
 гвозди оцинкованные 16d (2 фунта)
 скоба для проволоки для птицы (250)
 Болты с квадратным подголовком 12–1 / 2 дюйма длиной 4 дюйма с шайбами ​​и гайками
 один литр консерванта или морилки
 Дополнительные материалы — для крышек 
 1-4 X 8 футов. лист наружной фанеры 1/2 дюйма
 Лист наружной фанеры толщиной 1–4 X 4 фута 1/2 дюйма
 Петли оцинкованные, 1–3 дюйма
 двадцать четыре болта из оцинкованной стали 3/16 дюйма с шайбами ​​и гайками
 Порядок строительства 
 Вырежьте две части размером 31 1/2 дюйма и две 36-дюймовой заготовки из обработанного под давлением пиломатериала размером 2 дюйма на 4 дюйма длиной 12 футов. Соедините встык и прибейте четыре части в «квадрат» размером 35 дюймов на 36 дюймов. Повторите, построив еще три каркаса из оставшихся 12 футов пиломатериалов 2 ″ X 4 ″.
 Отрежьте четыре отрезка металлической ткани длиной 37 дюймов. Загните края проволоки на 1 дюйм. Протяните отрезки аппаратной ткани поперек каждого каркаса. Убедитесь, что углы каждой рамки квадратные, а затем плотно прикрепите экран через каждые 4 дюйма по краю. Каркасы из дерева и проволоки станут разделителями в вашем компостере.
 Установите две перегородки на конце, на расстоянии 9 футов друг от друга и параллельно друг другу. Расположите два других разделителя так, чтобы они были параллельны концевым разделителям и находились между ними на равном расстоянии.Поместите 36-дюймовые края на землю. Измерьте положение центров двух внутренних разделителей вдоль каждого 9-футового края.
 Отрежьте 9-футовый кусок из каждой 10-футовой длины обработанного давлением пиломатериала 2 X 4. Поместите две обработанные доски поперек верхних частей разделителей так, чтобы каждая прилегала к внешним краям. Измерьте и отметьте на 9-футовых досках центр каждой внутренней перегородки.
 Совместите отметки и через каждое соединение доски и разделителя просверлите отверстие диаметром 1/2 дюйма с центром на расстоянии 1 дюйма от края.Закрепите доски болтами с квадратным подголовком, но пока не затягивайте их. Поверните агрегат так, чтобы обработанные доски оказались внизу.
 Вырежьте один 9-футовый кусок из 10-футового строительного бруса 2 X 4. Прикрепите доску к задней части верха, повторив процесс, используемый для прикрепления базовых досок. Используя квадрат плотника или измеряя между противоположными углами, убедитесь, что корзина квадратная. Надежно затяните все болты.
 Прикрепите ткань для оборудования длиной 9 футов к задней стороне корзины со скобами через каждые 4 дюйма вокруг рамы.
 Вырежьте четыре куска длиной 36 дюймов из бруса 2 X 6 длиной 16 футов для передних направляющих. (Сохраните оставшиеся 4 фута длины.) Разрежьте две из этих досок на две полосы шириной 4 3/4 дюйма. (Сохраните две оставшиеся полоски).
 Прибейте полоски шириной 4 3/4 дюйма к передней части внешних разделителей и плинтуса так, чтобы они были заподлицо сверху и с внешних краев. Отцентрируйте две оставшиеся доски шириной 6 дюймов на передней части внутренних разделителей заподлицо с верхним краем и надежно прибейте.
 Отрежьте оставшиеся 4 фута бруса 2 X 6 на кусок длиной 34 дюйма, а затем разрежьте этот кусок на четыре равные полосы. Обрежьте две полосы, сохраненные с шага 8 до 34 дюймов. Прибейте каждую 34-дюймовую полосу к внутренней стороне разделителей так, чтобы они были параллельны доскам, прикрепленным к передней части, и на расстоянии 1 дюйма от них. Это дает 1-дюймовый вертикальный паз на внутренней стороне каждого разделителя.
 Разрежьте шесть 8-футовых пиломатериалов 1 X 6 на восемнадцать реек, каждая длиной 31 1/4 дюйма.Вставьте горизонтальные планки, по шесть на лоток, между разделителями и в вертикальные прорези.
 (Необязательно) Разрежьте лист внешней фанеры размером 4 на 8 футов на две части размером 3 на 3 фута. Разрежьте лист наружной фанеры размером 4 на 4 фута на один кусок размером 3 на 3 фута на одном из трех ящиков и прикрепите каждый к задней, верхней доске двумя петлями.
 Окрашивать всю необработанную древесину.
 Деревянный трехъярусный токарный блок 
 Этот поворотный блок представляет собой прочную прочную конструкцию, но может быть сложно установить стойки до указанных размеров.Перед тем, как разрезать съемные планки, которые входят в пазы в передней части каждого бункера, отрежьте одну планку и проверьте правильность установки в каждом бункере.
 Материалы 
 (Все пиломатериалы должны обрабатываться под давлением)
 стойки 8–4 дюйма x 4 дюйма x 6 футов
 Задние планки 7–1 дюйм x 6 дюймов x 12 футов
 Торцевые / боковые планки 14–1 дюйм x 6 дюймов x 4 фута
 Передние панели размером 4–1 дюйм x 6 дюймов x 4 фута
 Разделители 14–1 дюйм x 6 дюймов x 46 1/4 дюйма
 24–1 дюйм x 6 дюймов x 42 13/16 дюйма (приблизительно) передние планки [Примечание: перед тем, как разрезать все передние планки, отрежьте одну и проверьте, подходит ли она для каждого бункера. ]
 Шипы размером 4–1 дюйм x 1 (+) — дюйм x 4 фута, отрезанные от одного четырехфутового шипа 1 x 6 (шипы являются фиксаторами планок)
 Оцинкованные гвозди или шурупы для настила 8d
 Однотрубный клей для наружных работ
 (дополнительно) одна верхняя направляющая размером 1 дюйм x 6 дюймов x 12 футов
 Инструменты 
 Ямокопатель для столбов
 молоток
 пила
 рулетка
 сверло
 Порядок строительства с использованием деревянных реек 
 На ровной поверхности установите восемь стоек, как показано ниже, с помощью копателя ямок.(Столбы показаны затемненными квадратами.) Поместите каждый столб в землю на 2 фута. Убедитесь, что все стойки расположены вертикально (перпендикулярно земле). Верх каждой стойки должен находиться на одинаковом расстоянии от земли (48 дюймов). [Примечание: размеры, указанные для задней части стойки, включены для помощи в расстановке столбов. ]
 Гвоздь (или винт) на заднюю и боковые планки и разделители (предварительно просверлите все отверстия, чтобы предотвратить раскалывание). Нанесите клей на все стыки. Нижние рейки должны находиться на уровне земли. Оставьте промежуток в 1 1/2 дюйма (по горизонтали) между планками.Обратите внимание, что концы разделителей должны выходить на 1 дюйм позади передней части передних стоек, как показано на рисунке выше.
 Установите передние панели и планки, как показано для одной из центральных опор разделителя.
 После того, как передние планки будут подобраны по размеру и обрезаны, вставьте их на место между передними планками и планками, как показано на завершенной иллюстрации корзины выше.
 (Необязательно) Прибейте верхнюю направляющую к каждой передней стойке, как показано на завершенной иллюстрации мусорного ведра выше.Не используйте клей и не забивайте гвозди полностью, так как они будут удалены, чтобы обеспечить доступ к планкам. Рекомендуется использовать верхнюю направляющую для предотвращения бокового смещения передних стоек. Другой способ воспрепятствовать этому — использовать стойки размером 4 дюйма x 4 дюйма x 7 футов и врезать их на один фут глубже.
 Трехъярусный токарный агрегат для бетонных блоков 
 Станок для поворота бетонных блоков выглядит как три удерживающих устройства в ряд. Он прочный и недорогой в строительстве, если доступны использованные бетонные блоки.
 Материалы и инструменты 
 восемьдесят шесть бетонных блоков
 четыре бетонных полублока
 рабочие перчатки
 деревянные или металлические стойки для стабилизации бункера
 Порядок строительства с использованием бетонных блоков 
 Поместите двадцать пять бетонных блоков вдоль земли на участке компостирования, как показано на рисунке ниже. Оставьте около 1/2 дюйма между каждым блоком, чтобы впустить воздух.
 На иллюстрации выше показан бетонный блок с центральной щелью, позволяющей легко разделить его на два полублока. Надрежьте каждую сторону блока в плоскости надреза зубилом. Затем используйте долото и молоток, чтобы расколоть блок по счету.
 Добавьте второй слой блоков, расположив их в шахматном порядке для повышения устойчивости. Используя приведенную выше иллюстрацию поворотного устройства в качестве ориентира, разместите десять полных и два полублочных блока вдоль задней стенки и по три блока вдоль каждой стороны. Оставьте примерно 1/2 дюйма между каждым блоком.
 Добавьте третий слой блоков, снова расположив их в шахматном порядке для повышения устойчивости.Поместите двенадцать блоков через заднюю часть корпуса и по три блока с каждой стороны.
 Последний и верхний слой должен иметь десять полных и два полублоков на задней стороне и по два полных блока с каждой стороны.
 Чтобы сделать устройство более устойчивым, проденьте в отверстия в блоках деревянные или металлические стойки.
 Компостер для бочек 
 Преимущество бочкового компостера перед другими конструкциями состоит в том, что органические материалы можно легко переворачивать, просто вращая бочонок. Бочковой компостер относительно легко построить, используя следующий план. Также коммерчески доступны несколько производимых бочкообразных компостеров.
 Материалы 
 одна бочка емкостью 55 галлонов (компостер)
 два 2 3/4 ″ диам. x 3/4 ″ (подшипники) белый
 4, 40 x 2 x 4 ″ (стойки каркаса)
 4, 29 3/4 x 2 x 4 ″ (рама по горизонтали)
 2, 40 5/8 x 1 x 3 ″ (поперечные распорки) сосна белая
 4, 23 3/4 x 1 x 3 ″ (угловые раскосы) сосна белая
 2, диаметр 7 1/2 ″.x 3/4 ″ (подшипники) сосна белая
 Петли 2, 1 л / 2 x 2 ″
 1 маленькая застежка
 Стальной стержень 1, 1/2 x 40 1/2 ″
 Болты для печки 1, 2 1/4 x 11/4 ″
 28, 1 1/2 ”# 10 шурупы для дерева
 1 пинта плоской черной краски.
 Стальная ось оси входит в отверстия диаметром 1/2 дюйма в горизонтальных отверстиях два на четыре. Деревянные опорные диски прикручиваются к барабану четырьмя болтами диаметром 1 1/4 дюйма.
 Для получения однородного компоста бочку поворачивают несколько раз при добавлении нового материала.Напротив отверстия просверливаются отверстия для воздуха.
 Порядок строительства 
 Начните с получения хорошей бочки на 55 галлонов, желательно такой, в которой нет токсичных химикатов. Бочки с краской — хороший выбор, так как внутри они уже имеют защитное покрытие из краски. Если он еще не окрашен, рекомендуется нанести защитное покрытие.
 Просверлите отверстие 1/2 дюйма точно по центру обоих концов ствола для размещения стального стержня 1/2 дюйма. (Обратитесь к иллюстрации, чтобы сделать простой инструмент для определения местоположения центров.) Удерживая закругленный конец калибра в любом месте по окружности, нарисуйте линию примерно в центре. Переместите датчик на 90 градусов и начертите еще одну линию. Пересечение этих линий и будет точным центром.
 Затем нарисуйте линии отверстия в бочке, стараясь слегка закруглить углы. Просверлите отверстие 1/4 дюйма где-нибудь вдоль одной из линий, чтобы запустить сабельную пилу. Если у вашего ствола есть ребра, как у большинства из них, вам придется вырезать на каждом ребре V-образный вырез толщиной 1 дюйм, чтобы облегчить открытие двери.Прикрепите петли и засов к стволу и крышке с помощью болтов 1 на 1/4 дюйма.
 Из белой сосны 3/4 дюйма вырежьте два круга диаметром 7 1/2 дюйма и два круга диаметром 2 3/4 дюйма. Просверлите отверстие диаметром 1/2 дюйма в центре каждого и нанесите клей на круги диаметром 2 3/4 дюйма. Приклейте круги диаметром 2 3/4 дюйма к кругам диаметром 7 1/2 дюйма. Это можно легко сделать, если круги временно надеть на стальной стержень 1/2 дюйма и зажать. После высыхания клея снимите диски, вставьте стержень в ствол и соберите, как показано на рисунке, используя четыре болта размером 1 1/4 на 1/4 дюйма в каждом.
 Чтобы построить опорную раму, отрежьте 2 на 4 по длине и, используя угловое соединение внахлест, закрепите двумя шурупами 1 1/2 дюйма № 10 в каждом соединении. Стойки также должны быть отодвинуты на 23 дюйма снизу, чтобы можно было разместить доску размером 1 на 3 дюйма. Чтобы сделать угловое соединение внахлест, просто удалите половину толщины ложа до длины, сопоставимой с шириной ложа на обоих концах всех частей.
 полдюйм отверстия для размещения стержня должно быть пробурено в точном центре верхней горизонтальной части перед сборкой верхней части опорной рамы.Пропустите стальной стержень 1/2 дюйма с прикрепленным к нему стволом через эти отверстия и вставьте поперечины в опорные стойки. Закрепите шурупами № 10 шириной 1 1/2 дюйма. Затем отрежьте кусок размером 1 на 3 на 23 1/4 дюйма под углом 45 градусов с обоих концов и прикрепите шурупами для дерева 1 1/2 дюйма № 10 поперек углов, как показано на рисунке.
 Просверлите несколько рядов отверстий диаметром 1/4 дюйма вдоль дна ствола точно под дверным проемом, чтобы удалить лишнюю влагу. Покрасьте устройство в плоский черный цвет, чтобы он лучше поглощал тепло.
 Куча 
 Компостирование кучи — это просто компостирование без конструкции. Органические материалы добавляются в кучу по мере их поступления. Для лучшего разложения; куча не должна превышать трех футов в высоту, но длина может варьироваться в зависимости от имеющихся материалов. Когда будет достигнут достаточный размер, лучше всего начать новую кучу для свежих материалов, позволяя исходной куче разложиться с помощью периодических переворачиваний.
 Компостирование ямы 
 Компостирование ям означает компостирование в неглубоких ямах, вырытых в земле, в отличие от наземных построек.Яма вырывается примерно на 2 фута глубиной, 3 фута шириной и любой длины. Стены ямы могут быть облицованы обработанным деревом, кирпичом или каменной кладкой, или же их можно оставить без облицовки, если окружающая почва хорошо уплотняется и остается твердой. Если используются строительные материалы, стены могут выступать над уровнем земли.
 Компостирование ямы не обеспечивает хорошей аэрации и происходит в основном в анаэробных условиях (при отсутствии хорошего воздушного потока). Поэтому процесс компостирования в ямах длится дольше, чем в надземных сооружениях.
 Компостирование пластиковых пакетов 
 Компостирование пластиковых пакетов — это, пожалуй, самый простой из всех методов компостирования, не требующий никакой конструкции, кроме черного пластикового мешка для мусора.
 Пакеты должны быть размером от 30 до 40 галлонов и объемом не менее 3 мл. по толщине. Сумка этого размера должна вмещать примерно 3 бушеля органических материалов.
 Для наилучшего разложения попробуйте поместить в пакет как коричневые, так и зеленые органические материалы. В каждый пакет добавьте 1 стакан нитрата аммония и около 1/4 стакана гашеной извести (в этом случае известь используется для противодействия кислотности, которая возникает в анаэробных условиях внутри пакета).Затем добавьте около литра воды, плотно закройте пакет и отложите на полгода-год. Вы не должны переворачивать смесь или добавлять воду после закрытия пакета. Если возможно, поставьте пакеты в солнечном месте, где они могут поглощать тепло. Зимой переместите сумки в отапливаемый гараж или подвал.
 Компостирование из полиэтиленовых пакетов удобно, но, как и при компостировании ямы, этот процесс происходит в основном в анаэробных условиях и намного медленнее, чем компостирование в хорошо вентилируемых помещениях.
 Информация, представленная в данном документе, предназначена только для образовательных целей.Ссылки на коммерческие продукты или торговые наименования сделаны с пониманием того, что не предполагается никакой дискриминации и не подразумевается поддержка со стороны Texas AgriLife Extension Service.
 Образовательные программы Техасской службы распространения знаний AgriLife открыты для всех людей независимо от расы, цвета кожи, пола, инвалидности, религии, возраста или национального происхождения.
 Публикация отредактирована в феврале 2009 г.
 Улавливание структур рибозима Hammerhead в действии путем модуляции общего базового катализа 
 Abstract 
 Мы получили прекаталитические (комплекс фермент – субстрат) и посткаталитические (комплекс фермент – продукт) кристаллические структуры активной полноразмерной РНК типа «головка молотка», которая расщепляется в кристалле.Используя последовательность РНК «головки молотка» природного сателлитного вируса кольцевой пятнистости табака, реакцию саморасщепления модулировали путем замены основного основания рибозима, G12, на A12, пуриновый вариант с гораздо более низким pK  и , который не оказывает значительного воздействия на рибозим. атомная структура. Активный, но медленно расщепляющийся рибозим, таким образом, позволяет изолировать комплексы фермент-субстрат и фермент-продукт без модификации нуклеофила или уходящей группы реакции расщепления, а также любых других аспектов субстрата.Структура комплекса предиссоциации фермент-продукт выявляет взаимодействия РНК и ионов металлов, потенциально имеющие отношение к стабилизации переходного состояния, которые отсутствуют в докаталитических структурах.
 Сведения об авторе 
 Ферменты используют вариации нескольких стандартных подходов к катализированию реакций. Один из этих подходов, кислотно-основной катализ, имеет такое фундаментальное значение, что является общим как для белковых ферментов, так и для ферментов на основе РНК или рибозимов. Рибозим в форме головки молотка — один из таких рибозимов, который использует инвариантный остаток гуанина в качестве основного основания в своей каталитической реакции.Изменив его на аденин, мы можем снизить скорость реакции в 100000 раз, что позволит нам улавливать как активные, докаталитические, так и посткаталитические формы рибозима. Мы использовали этот подход для получения трехмерных структур рибозима «головка молотка» с близким к атомарным разрешением как до, так и после каталитического саморасщепления. Эти структуры обеспечивают дополнительные представления о химической стадии катализа рибозима в форме головки молотка.
  Образец цитирования:  Chi Y-I, Martick M, Lares M, Kim R, Scott WG, Kim S.-H (2008) Улавливание структур рибозима в форме головки молотка в действии путем модуляции общего базового катализа.PLoS Biol 6 (9):
 e234. 
 https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0060234
  Академический редактор:  Джеральд Ф. Джойс, Исследовательский институт Скриппса, Соединенные Штаты Америки
  Поступила:  8 апреля 2008 г .;  Одобрена:  18 августа 2008 г .;  Опубликовано:  30 сентября 2008 г.
  Авторские права:  © 2008 Chi et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
  Финансирование:  Исследование было поддержано грантами Национальных институтов здравоохранения WGS, SHK и YIC.
  Конкурирующие интересы:  Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.
  Сокращения:  Smα,  Schistosoma mansoni  альфа-повторяющаяся последовательность; sTRSV,
 спутниковый вирус кольцевой пятнистости табака
 Введение 
 Рибозим «голова молота» с момента его открытия в геномах РНК сателлитных вирусов [1,2] был в центре внимания экспериментов, направленных на корреляцию структуры РНК с катализом РНК, поскольку это сравнительно небольшая РНК, биохимия которой интенсивно изучалась. исследованы с использованием самых разных подходов [3–5].Недавно открытие, что природные РНК типа «голова молотка», имеющие третичные контакты, удаленные от активного центра, могут усиливать катализ примерно в 1000 раз по сравнению с «минимальными» «головками молота» [6–9], потребовало возобновления механистических и структурных исследований.
 Природные рибозимы типа «головка молотка» делятся на два различных класса [6] в зависимости от природы третичных контактов между ножкой I и ножкой II (рис. 1). Наиболее хорошо охарактеризованный представитель первого класса естественных «головок молота» встречается внутри сателлитной РНК вируса кольцевой пятнистости табака (sTRSV), который также является первым обнаруженным рибозимом «головка молотка» [10].Наиболее охарактеризованный представитель второго класса естественных «головок молота» встречается в мультимерном РНК-транскрипте повторяющейся ДНК Schistosoma mansoni alpha (Smα) с повторяющейся последовательностью в геноме S. mansoni [11,12]. Структура [13] полноразмерного комплекса шистосомы «голова молотка» [12] рибозим-конкурентный ингибитор, в котором недавно был получен аналог субстрата, содержащий модифицированный нуклеофил 2′-OMeC17, показывающий, как G12 становится позиционированным для инициации расщепления в качестве общего основания, и как G8 может действовать как обычная кислота в катализе рибозимом в форме головки молотка.Однако субстрат был инактивирован заменой нуклеофильного 2′-ОН нуклеотида сайта расщепления (C17) на инертную эфирную связь, таким образом потенциально изменяя среду активного сайта.
 Рис. 1. Два класса полноразмерных рибозимов с головкой молотка
 Вторичные и схематические третичные структурные представления головки молотка sTRSV (A) и головки молотка  Schistosoma  [12] (B), изображающие два класса [6] рибозима головки молотка третичные контакты.
 https: // doi.org / 10.1371 / journal.pbio.0060234.g001
 Мы получили две кристаллические структуры из полноразмерной РНК типа «головка молотка» sTRSV с немодифицированным сайтом расщепления, имеющим активный нуклеофил. К ним относятся активный комплекс фермент-субстрат, захваченный непосредственно перед каталитическим отщеплением от свежевыращенных кристаллов, и активный комплекс фермент-продукт, уловленный перед диссоциацией продукта, после отщепления (рис. 2) от кристаллов, которым позволили состариться в течение нескольких недель.
 Рисунок 2.Реакция саморасщепления рибозима «головка молотка»
 Схематическая диаграмма комплексов фермент-субстрат, переходное состояние и фермент-продукт немодифицированного активного сайта «головка молотка», интерполированная из структуры 2GOZ, в которой G12 (красный) позиционируется как общее основание в реакции расщепления, и позиция G8 (синий) соответствует возможной роли в кислотном катализе. Чтобы функционировать как общее основание, N1 G12 должен быть депротонирован (как показано), и затем он может абстрагировать 2′-H от C17 (черный) для образования нуклеофила.2′-ОН G8 (синий) расположен так, чтобы отдавать протон 5′-O остатка N1.1, уходящей группы в реакции самоотщепления. Зеленые стрелки представляют собой электронные пары, которые обеспечивают перенос протона, а также разрыв и образование ковалентных связей. Переходное состояние состоит из тригонально-бипирамидного оксифосфорана, в котором нуклеофил и уходящая группа занимают аксиальные позиции. Частичное образование и разрыв связи обозначены пунктирными линиями. Как показано, продукты реакции расщепления содержат 2 ‘, 3′-циклический фосфат и 5’-ОН-концы.2 ‘, 3’-циклический фосфат не гидролизуется рибозимом и в структуре находится в форме комплекса предиссоциации. В структуре головки молотка sTRSV модификация G12A приводит к гораздо более слабому основанию, но не протонируется по N1. Нуклеотид N1.1 не консервативен. В 2ГОЗе это C1.1, а в ударной головке sTRSV — A.
.
 https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0060234.g002
 Вместо инактивации нуклеофила посредством метилирования, как это было сделано с головкой молотка шистосомы [12], реакция расщепления в случае головки молотка sTRSV была значительно замедляется с вариантом активного центра фермента G12A, который снижает pK  a  общего пуринового основания в реакции расщепления примерно с 9.От 5 до примерно 3,5, что, если предположить наблюдаемую логлинейную зависимость скорости [6,14,15] от pH, потенциально представляет собой уменьшение скорости реакции примерно в 10  6  раз. Ранее сообщалось, что мутация G12A в контексте минимального рибозима «головка молотка» вызывает более чем 500-кратное снижение скорости расщепления [16]. Совсем недавно было показано, что полноразмерный рибозим «головка молотка» вироида латентной мозаики персика с заменой G12A обладает очень ограниченной активностью расщепления [17].Мы измерили приблизительно 10 -6 -кратное снижение скорости замены G12A в полноразмерной головке молота, а также показали, что модификация G12A сохраняет стандартную зависимость скорости реакции молота от pH (см. Рис. S4). Корреляция между pK  a  s различных производных пурина, замещенных в положении 12, и скоростью расщепления рибозима «головка молотка» была тщательно исследована с использованием нуклеотидов инозина, диаминопурина и 2-аминопурина, замещенных G12 [18].Все эти результаты согласуются с пурином на G12, функционирующим в качестве общего основания, а также с мутантом G12A, являющимся очень плохим, но не полностью неактивным, общим основанием. За счет значительного замедления реакции РНК в форме головки молотка кристаллизуется до расщепления, но остается активной в кристалле и медленно расщепляется. Мы использовали это свойство для получения как реагирующих (предкаталитических), так и продуктовых (посткаталитических) структур активного рибозима в форме головки молотка с разрешением 2,4 Å и 2,2 Å соответственно.
 Результаты и обсуждение 
 В нашем исследовании использовались два набора данных; один, реагент, дифрагирует с разрешением 2,4 Å, а другой, продукт расщепления, дифрагирует с разрешением 2,2 Å. В обоих наборах данных две кристаллографически независимых структуры из 69 нуклеотидов в форме головки молотка (рисунок S1) занимают элементарную ячейку P1 (a = 27,9 Å, b = 53,0 Å, c = 72,0 Å, α = 74,6 °, β = 81,4 °, γ = 75,6 °). °) [19]. Единственное существенное различие между молекулой 1 и молекулой 2 внутри асимметричной единицы заключается в области третичного контакта, где электронная плотность для нескольких нуклеотидов, участвующих в третичном контакте в молекуле 2, довольно мала, что указывает на беспорядок и динамическую гибкость в структуре. в остальном характеризуется хорошо разрешенной и легко интерпретируемой картой электронной плотности.Две докаталитические (неразрезанные) модели были однозначно построены на карте электронной плотности 2,4 Å и уточнены. Уточнение структуры реагента данных 2,4 Å (таблицы 1 и 2) ясно показывает, что обе молекулы в асимметричном звене находятся в нерасщепленном, докаталитическом состоянии, тогда как обе молекулы в асимметричном звене структуры продукта 2,2 Å (таблицы 1 и 2) находятся в расщепленном посткаталитическом состоянии.
 Структура комплекса фермент-субстрат в форме головки молотка 
 Предварительное расщепление или структура фермент-субстратного комплекса G12A sTRSV РНК «головка молотка» в 2.Разрешение 4 Å выявляет активный сайт (рис. 3А), очень похожий на сайт головки молотка Smα (рис. 3В), несмотря на присутствие модификации 2′-OMe в последней и замену G12A в головке молотка sTRSV. Следовательно, можно сделать вывод, что ни одна из модификаций не нарушает сильно атомную структуру активного сайта рибозима в форме головки молотка. В этом смысле нерасщепленная головка молотка sTRSV и структура головки молотка Smα являются полезными внутренними экспериментальными контролями, которые снимают любые опасения, что либо предыдущая модификация 2′-OMe, либо текущая замена G12A индуцируют образование каталитически некомпетентной структуры рибозима в форме головки молотка.Был проведен тщательный анализ двух десятилетий экспериментальных результатов, полученных в результате биохимических и механистических исследований рибозима «головка молотка» [20,21], который подтверждает оценку того, что конформация активного центра «головка молотка» Smα и, следовательно, аналогичная конформация активного центра «головка молотка» sTRSV, действительно представляют каталитически компетентное структурное состояние.
 Рис. 3. Активные участки рибозима «головка молотка» и активные участки продукта
 (A и B) Стерео изображения двух активных участков рибозима «головка молотка» [37].Активный центр нерасщепленной головки молотка sTRSV G12A (A) с немодифицированным нуклеофилом и головки молотка из шистосомы 2GOZ [12] (B) с модификацией 2′-OMe нуклеофильного 2′-кислорода C17. Водородные связи показаны голубыми пунктирными линиями, траектория образования связи обозначена красной пунктирной линией, а потенциальные «активные» водородные связи в базовом катализе обозначены розовыми и оранжевыми пунктирными линиями.
 (C) изображает суперпозицию (A) и (B).
 https: // doi.org / 10.1371 / journal.pbio.0060234.g003
 Некоторые небольшие различия между структурой фермент-субстратного комплекса sTRSV «головка молотка» и соответствующим комплексом фермент-ингибитор Smα «головка молотка» действительно существуют (Рис. 3C). Немодифицированный 2′-ОН C17 в последнем, по-видимому, немного больше соответствует ножницеобразному фосфату (168,5 ° против 162 °), а положение A12 немного отличается из-за другого взаимодействия водородных связей с A9. который заменяет пару G12 / A9 (рис. 3A – 3C).Основное отличие состоит в том, что водородная связь между экзоциклическим амином G12 и N7 A9 по необходимости отсутствует в структуре G12A, так что существует только одна водородная связь между A9 и A12 (рис. 3A), а не три (рис. 3B). ). Конечный эффект заключается в том, что положения A9 и A12 в структуре sTRSV G12A слегка изменяются по сравнению со структурой G12 (2GOZ), как видно из суперпозиции остатков активного сайта (рис. 3C). Разница в абсолютных положениях ножничного фосфора в двух наложенных друг на друга структурах равна 1.7 Å. Геометрия G12A sTRSV, по-видимому, несколько лучше подходит для инициирования реакции расщепления. В частности, угол между N1 A12, нуклеофилом 2’O (C17) и соседним ножничным фосфором составляет 149 °, а расстояние между N1 и O2 ‘составляет 2,7 Å. Соответствующий угол в структуре G12 с модифицированной подложкой (2GOZ) составляет 139 °, а расстояние от N1 до O2 ‘составляет 3,5 Å. Линейный угол атаки (между O2 ‘, P и O5’) составляет 168 ° в структуре G12A по сравнению со 162 ° в предыдущей структуре G12.Следовательно, низкая скорость расщепления, по-видимому, в первую очередь связана с результатом сдвига пурина pK  на  от приблизительно 9,5 до приблизительно 3,5 после замены G12A, а не из-за неблагоприятного структурного нарушения. Чтобы инициировать реакцию расщепления, должна происходить депротонирование G12 (рис. 2), но G12 почти наверняка протонируется в кристаллической структуре 2GOZ при pH 6,5, тогда как A12 обычно депротонируется при нейтральном pH. В этом смысле A12 может быть лучшим (хотя и гораздо более медленным) представлением активированного рибозима, пригодного для общего основного катализа, даже несмотря на то, что A12 является гораздо более слабым основанием, чем G12, из-за его гораздо меньшего pK  a .
 Структура комплекса фермент-продукт Hammerhead 
 Уточнение гипотетически неразрезанной структуры с использованием набора данных продуктов расщепления с разрешением 2,2 Å, полученного из кристаллов, которым разрешено старение, выявило уникальные и значительные (> 3 σ) отрицательные разностные пики Фурье (рис. 4A), расположенные непосредственно на атомах O5 ′ атома A1 .1 каждой молекулы гипотетически неразрезанной модели (без применения усреднения некристаллографической симметрии), в дополнение к четким разрывам на сигма-A-взвешенных картах 2Fo-Fc [22-25] в тех же местах (Рисунки 4B и S1B), тем самым демонстрируя, что субстратная РНК находится преимущественно в расщепленном состоянии.Пик Фурье отрицательной разницы на молекуле 1 (рис. 4A) немного более выражен, и последующее уточнение структуры, в которой 2 ‘, 3′-циклический фосфат был добавлен к C17, а фосфат, связывающий его с A-1.1, был заменен с концевым 5’-OH, гораздо лучше соответствует наблюдаемой электронной плотности (рис. 4B и 4C). Молекула 1, по-видимому, полностью расщеплена, тогда как небольшое количество молекулы 2 может оставаться в нерасщепленной форме. Таким образом, расщепление молекулы 2 лучше всего интерпретировать как частично неполное, и примечательно, что возможно менее полное расщепление соответствует молекуле, в которой третичный контакт менее четко определен, что указывает на то, что третичный контакт может функционировать как молекулярный модулятор в жизни. цикл РНК сателлитного вируса, который регулирует активность расщепления и, возможно, религии.Внутреннее равновесие рибозима «головка молотка» sTRSV в значительной степени способствует расщеплению по сравнению с нерасщепленным состоянием, тогда как внутреннее равновесие «головки молотка» Smα таково, что лигируется около 1/3 РНК [26].
 Рис. 4. Расщепление рибозима Hammerhead в кристалле
 (A) Уточнение нерасщепленной структуры по данным продукта расщепления дает отрицательный остаточный пик (или  F  calc —  F  obs) (показан красным, с контуром 3 σ) с центром на 5′-кислороде, уходящей группе реакции расщепления.Разрыв на карте 2Fo-Fc (показан синим цветом, с контуром 1,0 σ) очевиден, несмотря на смещение модели из-за неразрезанной структуры. Это проявляется в обеих кристаллографически независимых молекулах в асимметричной единице.
 (B) Усовершенствованная структура со сколами лучше соответствует электронной плотности.
 (C) Стерео-изображение активного сайта рибозима «головка молотка», показывающее потенциальные (желтые и оранжевые пунктирные линии) и фактические (розовые пунктирные линии) взаимодействия связывания с участием двух ионов Mg  2+  (желтые сферы) и РНК.Потенциальные взаимодействия могут образовывать стабилизирующие контакты, когда ножницеобразный фосфат находится в переходном состоянии тригонально-бипирамидного оксифосфората, помогая рассеивать избыточный отрицательный заряд. В частности, инвариант A9 может участвовать во взаимодействиях стабилизации переходного состояния при экстраполяции из структуры продукта, как показано оранжевыми пунктирными линиями.
 https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0060234.g004
 Расколотая структура показывает несколько взаимодействий, потенциально имеющих отношение к каталитическому механизму (рис. 4C).В молекуле 1 структуры продукта расщепления два иона Mg  2+ , по-видимому, взаимодействуют с подвижным фосфатом, который находится в 2 ‘, 3′-циклической форме. Кроме того, 2’-OH в G8, ранее предполагавшийся, возможно, кислотный катализатор [13,18], образует водородную связь с более проксимальным немостиковым кислородом фосфата циклического фосфата. N1 и N6 в A9 также расположены примерно в 4,5 Å от того же немостикового циклического фосфатного атома кислорода, как и ион Mg  2+ , связанный с фосфатом A9.Хотя эти последние расстояния, показанные оранжевыми и желтыми пунктирными линиями на рисунке 4C, слишком велики для образования связывающих взаимодействий в структуре продукта, вполне вероятно, что они образуют стабилизирующие взаимодействия в структуре переходного состояния тригонально-бипирамидного оксифосфорана, чтобы помочь диспергировать временно накапливающиеся избыточный отрицательный заряд, тем самым способствуя катализу. (Аналогичная роль аденозиновых оснований наблюдается в рибозиме шпильки [27], и хорошо известна потребность в ионах двухвалентных металлов или высокой концентрации положительного заряда [28] в реакции расщепления «головка молотка».) Второй ион Mg  2+  наблюдается в молекуле 1 для непосредственной координации с другим немостиковым циклическим фосфатным кислородом, что предполагает возможную роль второго иона Mg  2+  в стабилизации продукта расщепления или переходного состояния. Хотя единственный ион двухвалентного металла еще не наблюдался в кристаллической структуре головки молотка, чтобы связать мосты между ножницами и фосфатами A9 через предсказанную внутреннюю координацию [29], наблюдаемые взаимодействия ионов Mg  2+  и нуклеотидов A9, тем не менее, позволяют предположить, как стабилизация переходного состояния, особенно при низкой ионной силе, может быть облегчена.Поскольку эта посткаталитическая структура представляет состояние молекулы до диссоциации продукта из-за захвата кристаллической решеткой, мы предполагаем, что структура обнаруживает особенности, относящиеся к переходному состоянию, и которые являются дополнительными к характеристикам в нерасщепленном состоянии.
 Структуры третичного контакта головки молотка 
 Структура головки молотка  Schistosoma  Smα [13] показала, как дистальные третичные контакты стабилизируют конформационные изменения (относительно минимальной структуры) в активном центре рибозима «головка молотка».Однако большинство встречающихся в природе вирусных РНК в форме головки молотка, включая sTRSV, относятся к другому классу рибозимов в форме головки молотка, в которых тетрапетля на стержне II (обычно термодинамически предпочтительная тетрапетля GNRA) взаимодействует с замкнутой петлей на стержне I [6]. . Третичные контакты головки молотка Smα и sTRSV вызывают почти идентичные конформационные изменения в каталитическом ядре рибозима, несмотря на то, что последовательности и структуры двух областей третичного контакта радикально отличаются.Фактически, только одна пара третичных оснований является общей для обоих классов третичных контактов головки молотка (Рисунки 5, S2 и S3).
 Рис. 5. Третичные контакты рибозима «головка молотка»
 Крупным планом в стереорежиме третичных взаимодействий между стержнями I и II в РНК sTRSV «головка молотка». След фосфодиэфирного остова представлен в виде зеленых трубок, а нуклеотиды, которые участвуют в третичных контактах между стержнем I и стержнем II, явно показаны в виде фигурок с цветовой кодировкой атомов.Атомы углерода в нуклеотидах стержня I белые, а атомы углерода в нуклеотидах стержня II желтые. Атомы азота в обоих случаях имеют темно-синий цвет, атомы кислорода — красный цвет, а атомы фосфора — зеленый цвет. Водородные связи показаны синими пунктирными линиями. На рисунках S2A и S2B показаны дополнительные виды.
 https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0060234.g005
 В обоих классах третичных контактов головки молотка, очевидно консервативная [6] пара оснований Хугстина образуется между A в стержне-петле II и U в неспиральная область стебля I.Буква A в паре Hoogsteen соответствует положению 46 в головке молота sTRSV и L6 в головке молота Smα, а U соответствует положению 19 в головке молота sTRSV и B5 в головке молота Smα. Из 13 естественных последовательностей головки молота, рассмотренных в предыдущих исследованиях моделирования [6],  все  обладают этим конечным A в GNRA тетрапетле, закрывающей стержень II, а десять обладают этим U рядом с остатком 1.6, что позволяет предположить, что пара AU Hoogsteen сохраняется благодаря своему функциональная релевантность, несмотря на то, что до сих пор не поддавалась идентификации [6].(Остальные три последовательности имеют C вместо U, которые могут образовывать аналогичную пару Хугстина, если протонированы.) В новой кристаллической структуре sTRSV в форме головки молотка консервативная пара AU Хугстина находится внутри тройки оснований, в которой другой (очевидно неконсервативный) U из петля стержня I образует дополнительную пару оснований Watson-Crick с A из петли стержня II (рисунки 5, S2 и S3).
 Заключительные замечания 
 До 2003 года не было признано, что область третичного контакта, обладающая слабо узнаваемой консервацией последовательности, является критической для оптимального катализа [6,7], и впоследствии было обнаружено, что третичные контакты, которые обеспечивают увеличение скорости примерно в 1000 раз, вызывают драматические конформационные изменения в активном сайте рибозима в форме головки молотка, которые активируют его для катализа [13].Мы сообщаем здесь о первых, насколько нам известно, полноразмерных кристаллических структурах рибозима в форме головки молотка, в которых кристаллизованная молекула является каталитически активной, что позволяет захватывать как активный фермент-субстрат до расщепления, так и комплексы фермент-продукт после расщепления. Первый, по-видимому, находится в активной конформации, непосредственно предшествующей катализу, а последний находится в предиссоциированном состоянии, которое следует непосредственно за катализом. Таким образом, каждое из них обеспечивает дополнительные представления о ненаблюдаемом переходном состоянии, первое — непосредственно перед, а второе — сразу после образования переходного состояния, обеспечивая новое понимание механизма рибозимного катализа.
 Материалы и методы 
 Синтез и кристаллизация РНК. 
 О приготовлении и кристаллизации образцов РНК
 сообщалось ранее [19]. Вкратце, с использованием транскрипции in vitro из синтетической ДНК-матрицы, полученной из последовательности sTRSV, был синтезирован саморасщепляющийся рибозим в форме головки молотка (длиной 69 нуклеотидов). Поскольку продукт транскрипции дикого типа расщеплялся до завершения в реакции транскрипции, последовательность, имеющая мутацию в положении 51 (модификация G12A, с использованием схемы нумерации канонической головки молотка), которая приводила к значительному снижению скорости расщепления, была транскрибирована и кристаллизована. .Образец очищали на быстродействующем жидкостном хроматографе белков (FPLC) с использованием ионообменной колонки с диэтиламиноэтилом (DEAE), и кристаллы получали диффузией пара, как описано ранее [19]. Для сбора данных к маточному раствору постепенно добавляли 30% (об. / Об.) MPD, уравновешивая содержащие кристаллы капли ступенчато в течение 3 дней, перед мгновенным замораживанием потоком жидкого азота. Набор данных продукта расщепления 2,2 Å, в котором преимущественно расщепляется РНК, был получен из кристаллов, которые состарились значительно дольше, чем кристаллы, использованные для сбора набора данных реагентов.
 Определение и уточнение структуры. 
 Собственные наборы данных из монокристаллов были собраны при 100 K на пластинчатом детекторе R-AXISIIC, соединенном с генератором рентгеновских лучей Rigaku Rotaflex и зеркальной оптикой MSC / Yale. Наборы данных были обработаны с помощью DENZO [30] и масштабированы с помощью ротаваты / агроваты, реализованной в программном наборе CCP4 [24,31]. Окончательные статистические данные показаны в Таблице 1. Общая неполнота приблизительно 10% была вызвана в первую очередь отсутствием симметрии кристалла (пространственная группа P1).
 Кристаллическую структуру реагента определяли с разрешением 2,4 Å путем кусочного молекулярного замещения, используя в качестве модели несколько копий стандартной двойной спирали А-формы полиаденина с семью парами оснований (стержень). Первоначальный анализ содержания кристаллов показал, что в асимметричной единице присутствуют две молекулы sTRSV с головкой молотка ( V   M  = 2,23 Å  3  Da  -1 , 56% содержание растворителя, при условии, что плотность РНК составляет 1,7 г / см  3  [32,33]. Поиск молекулярной замены для шести стволов, три из которых потенциально составляют одну структуру головки молотка, был проведен Фазером [34] и решением ( Z  — оценка 7.7 для функции трансляции, которая была на 15% выше, чем следующее возможное решение). Последующее уточнение твердого тела с использованием CNS [35] привело к значениям  R   free  и  R , равным 46,1% и 49,6%, соответственно. Фазы были улучшены за счет этапов ручного перестроения и расчета составной карты исключения, реализованной в CNS, что позволило построить более 80% конструкции. Наконец, правильные соединения и правильная регистрация последовательности были выполнены с помощью недавно определенной полноразмерной структуры Smα с головкой молотка [13].Последующее уточнение было проведено Рефмаком [22] и Фениксом [25,36]. Модель была построена, и Mg  2+  и водные участки были идентифицированы и проверены с помощью COOT [23].
 Затем была решена структура продукта расщепления с использованием координат уточненной неразрезанной структуры. Расщепленное состояние субстрата было идентифицировано с помощью разностных карт Фурье, рассчитанных как в Refmac, так и в Phenix, и затем отображенных в COOT.Подробная статистика уточнения приведена в таблице 2.
 Дополнительная информация 
 Рисунок S1. Составная карта без электронной плотности 
 (A) Стерео изображение составной карты без электронной плотности расщепленной формы рибозима «головка молотка» с разрешением 2,2 Å с контурами со среднеквадратичным отклонением 1,0 (RMSD). Каждый пропущенный фрагмент в композите был сгенерирован путем пропуска уникальных 10% структуры РНК с последующим моделированием уточнения оставшейся части структуры (начальная температура 4000 K) для уменьшения фазового смещения модели в рамках программы кристаллографического уточнения CNS v .1.2. [35].
 (B) показывает увеличенный вид активного центра молекулы 1.
 https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0060234.sg001
 (6,59 МБ TIF)
 Рисунок S4. Кинетический анализ мутации G12A в полноразмерном рибозиме «головка молотка» 
 (A, B и C) являются результатами экспериментов, которые измеряют скорость мутантного G12A полноразмерного рибозима «головка молотка» при pH 7,4. (A) — это график подмножества моментов времени, показанных на (B). (C) является независимым экспериментальным повторением (A).При pH 7,4 скорость составляет примерно 0,0001 / мин во всех трех случаях. Типичный полиакриламидный гель показан на вставке (B). Нижняя полоса — это продукт, накапливающийся в различные моменты времени, а верхняя полоса — это реагент. При pH 8,4 (D) скорость в 10 раз выше, что согласуется с лог-линейной зависимостью между скоростью и pH, наблюдаемой на химической стадии реакций с головкой молотка. Расчетная скорость (*) головки молотка G12 дикого типа при pH 7,4 (экстраполирована из результатов, полученных при pH 6.5, из-за высокой скорости расщепления) составляет примерно 50 / мин. Следовательно, относительное соотношение мутантов к дикому типу при pH 7,4 составляет приблизительно 0,000002, что согласуется с 10  −6 -кратным эффектом, оцененным с использованием различий в pK  a  для G12 и A12 (т. Е. PK  a  = 9,5 — 3,5 = 6). Временные анализы были выполнены в соответствии с процедурой, описанной Мартиком и Скоттом (2006) [13]. Вкратце, 2 мкл  32  P-γ-ATP-меченного субстрата в виде головки молотка (10 пмоль / мкл) и 3 мкл 100 мкМ ферментной цепи в форме головки молотка были объединены с 2 мкл 1 М трис-HCl (pH 7.4 или 8.4), 0,8 мкл 5 M NaCl, 1,8 мкл 2,25 мМ EDTA и 15,4 мкл воды и нагревают до 95 ° C в течение 2 минут, затем до 65 ° C в течение 2 минут, а затем охлаждают до 20 ° C. Аликвоту 3 мкл удаляли и добавляли к 57 мкл стандартного буфера / красителя для PAGE и мгновенно замораживали с последующим добавлением 15 мкл 25 мМ MgCl  2  для инициирования реакции расщепления. Затем аликвоты удаляли из реакции и гасили через 10, 20 и 30 мин и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 24, 36, 48, 72 и 120 ч при pH 7,4 (A и B ) и до 12 ч (С).При pH 8,4 аликвоты удаляли через 0, 5, 10, 20, 30, 45 и 60 минут и через 2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9 и 10 часов (D). В каждом случае аликвоту смешивали с загрузочным буфером / красителем для ПААГ, содержащим 10-кратный молярный избыток ЭДТА для гашения реакции, и мгновенно замораживали.
 https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0060234.sg004
 (149 КБ PDF)
 Регистрационный номер 
 Координаты и амплитуды расщепленной (2QUW) и нерасщепленной (2QUS) структур доступны в базе данных белков (http: // www.rcsb.org).
 Благодарности 
 Мы благодарим Питера Цварта (Advanced Photon Source в Laurence Berkeley Labs) за полезные советы по уточнению, Гарри Ноллера и Центр молекулярной биологии РНК (Калифорнийский университет, Санта-Крус), а также бывших членов группы Kim (Университет из Калифорнии, Беркли), особенно Элизабет Холбрук, Джамиле Джанчарик и Джайвардхана Пандита за их помощь и советы на ранних этапах проекта.
 Вклад авторов 
 SHK задумал и разработал эксперименты.YIC проводил эксперименты. YIC и WGS проанализировали данные. YIC, MM и RK предоставили реагенты / материалы / инструменты для анализа. ML выполнила кинетический анализ рибозима. Авторы статьи — YIC и WGS.
 Список литературы 
 1.
 Нельсон Дж. А., Уленбек О. К. (2006) Когда верить тому, что вы видите. Mol Cell 23: 447–450.
 2.
 Westhof E (2007) Рассказ о молекулярном распознавании: рибозим в форме головки молотка. J Mol Recognit 20: 1–3.
 3.
 McKay DB (1996) Структура и функция рибозима «головка молотка»: незаконченная история.РНК 2: 395-403.
 4.
 Wedekind JE, McKay DB (1998) Кристаллографические структуры рибозима в форме головки молотка: связь с укладкой рибозима и катализом. Анну Рев Биофиз Биомол Структура 27: 475–502.
 5.
 Blount KF, Uhlenbeck OC (2005) Дилемма структуры-функции рибозима «головка молотка». Анну Рев Биофиз Биомол Структура 34: 415–440.
 6.
 Хворова А., Лескут А., Вестхоф Э., Джаясена С.Д. (2003) Элементы последовательности за пределами каталитического ядра рибозима в форме головки молотка обеспечивают внутриклеточную активность.Nat Struct Biol 10: 708–712.
 7.
 Де ла Пена М., Гаго С., Флорес Р. (2003) Периферические области природных рибозимов в виде головки молотка значительно увеличивают их активность саморасщепления. EMBO J 22: 5561–5570.
 8.
 Penedo JC, Wilson TJ, Jayasena SD, Hvorova A, Lilley DM (2004) Сворачивание природного рибозима в форме головки молотка усиливается взаимодействием вспомогательных элементов. РНК 10: 880–888.
 9.
 Лилли Д.М. (2003) Рибозимы — слишком далеко. Nat Struct Biol 10: 672–673.
 10.
 Проди Г.А., Бакос Дж. Т., Бузаян Дж. М., Шнайдер И. Р., Бройнинг Г. (1986) Автолитический процессинг димерной сателлитной РНК вируса растений. Наука 231: 1577–1580.
 11.
 Ferbeyre G, Bourdeau V, Pageau M, Miramontes P, Cedergren R (2000) Распространение мотивов РНК в виде головки молотка и головки молотка через GenBank. Genome Res 10: 1011–1019.
 12.
 Ferbeyre G, Smith JM, Cedergren R (1998) Сателлитная ДНК шистосомы кодирует активные рибозимы в форме головки молотка.Mol Cell Biol 18: 3880–3888.
 13.
 Мартик М., Скотт В.Г. (2006) Третичные контакты, удаленные от активного центра, подготавливают рибозим для катализа. Ячейка 126: 309–320.
 14.
 Dahm SC, Derrick WB, Uhlenbeck OC (1993) Доказательства роли сольватированного гидроксида металла в механизме расщепления головки молотка. Биохимия 32: 13040–13045.
 15.
 Canny MD, Jucker FM, Kellogg E, Khvorova A, Jayasena SD, et al. (2004) Кинетика быстрого расщепления природного рибозима в форме головки молотка.J Am Chem Soc 126: 10848–10849.
 16.
 Ruffner DE, Stormo GD, Uhlenbeck OC (1990) Требования к последовательности реакции саморасщепления РНК «головка молотка». Биохимия 29: 10695–10702.
 17.
 Przybilski R, Hammann C (2007) Идиосинкразическое расщепление и лигирование отдельных рибозимов в форме головки молотка и их вариантов ядерной последовательности. Biol Chem 388: 737–741.
 18.
 Han J, Burke JM (2005) Модель общего кислотно-основного катализа рибозимом в форме головки молотка: отношения pH-активности вариантов G8 и G12 в предполагаемом активном сайте.Биохимия 44: 7864–7870.
 19.
 Ким Р., Холбрук Э.Л., Джанчарик Дж., Пандит Дж., Вен X и др. (1994) Кристаллы высокого разрешения и предварительные рентгеноструктурные исследования каталитической РНК. Acta Crystallogr D50: 290–292.
 20.
 Nelson JA, Uhlenbeck OC (2008) Hammerhead redux: соответствует ли новая структура старым биохимическим данным. РНК 14: 605–615.
 21.
 Nelson JA, Uhlenbeck OC (2008) В минимальной и удлиненной головках молота используется аналогичный механизм динамической реакции для катализа.РНК 14: 43–54.
 22.
 Муршудов Г. Н., Вагин А. А., Додсон Э. Дж. (1997) Уточнение макромолекулярных структур методом максимального правдоподобия. Acta Crystallographica D53: 240–255.
 23.
 Эмсли П., Коутан К. (2004) Кут: инструменты построения моделей для молекулярной графики. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 60: 2126–2132.
 24.
 Winn MD (2003) Обзор проекта CCP4 в кристаллографии белков: пример совместного проекта.J Synchrotron Radiat 10: 23–25.
 25.
 Adams PD, Grosse-Kunstleve RW, Hung L-W, Ioerger TR, McCoy AJ и др. (2002) PHENIX: создание нового программного обеспечения для автоматического определения кристаллографической структуры. Acta Crystallog D58: 1948–1954.
 26.
 Canny MD, Jucker FM, Pardi A (2007) Эффективное лигирование рибозима головки молота Schistosoma. Биохимия 46: 3826–3834.
 27.
 Руперт ПБ, Мэсси А.П., Сигурдссон С.Т., Ферре-Д’Амаре А.Р. (2002) Стабилизация переходного состояния с помощью каталитической РНК.Наука 298: 1421–1424.
 28.
 Мюррей Дж. Б., Сейхан А. А., Вальтер Н. Г., Берк Дж. М., Скотт В. Г. (1998) Рибозимы «головка молотка», «шпилька» и VS каталитически эффективны только в отношении одновалентных катионов. Chem Biol 5: 587–595.
 29.
 Wang S, Karbstein K, Peracchi A, Beigelman L, Herschlag D (1999) Идентификация сайта связывания иона металла рибозима в форме головки молотка, ответственного за устранение вредного эффекта фосфоротиоата сайта расщепления. Биохимия 38: 14363–14378.
 30.
 Отвиновский З. (1993) Сбор и обработка данных. В: Сойер Л., Иссакс Н., Бейли С., редакторы. Материалы учебного уик-энда CCP4: сбор и обработка данных. Уоррингтон (Великобритания): SERC Daresbury Laboratory. С. 52–56.
 31.
 Collaborative Computational Project, Number 4 (1994) Набор CCP4: программы для кристаллографии белков. Acta Crystallogr D50: 76–763.
 32.
 Свергун Д.И., Фейгин Л.А. (1987) Структурный анализ методом малоуглового рентгеновского и нейтронного рассеяния.Нью-Йорк: Пленум Пресс. 120 с.
 33.
 Мэтьюз Б.В. (1968) Содержание растворителя в кристаллах белка. J Mol Biol 33: 491–497.
 34.
 McCoy AJ, Grosse-Kunstleve RW, Storoni LC, Read RJ (2005) Функции быстрого перевода с повышенными вероятностями. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 61: 458–464.
 35.
 Брюнгер А.Т., Адамс П.Д., Клор Г.М., ДеЛано В.Л., Грос П. и др. (1998) Система кристаллографии и ЯМР: новый пакет программного обеспечения для определения структуры макромолекул.Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 54 (Pt 5): 905–921.
 36.
 Adams PD, Gopal K, Grosse-Kunstleve RW, Hung LW, Ioerger TR и др. (2004) Последние разработки программного обеспечения PHENIX для автоматического определения кристаллографической структуры. J Synchrotron Radiat 11: 53–55.
 37.
 ДеЛано В.Л. (2003) Система молекулярной графики PyMOL. Доступно по адресу: http://pymol.sourceforge.net/overview/index.htm. Доступ 1 сентября 2008 г.
 Сборные железобетонные конструкции: описание, СНиП, технические условия, характеристики 
 Сборные железобетонные конструкции производятся на заводах и только потом доставляются на строительную площадку.С одной стороны, за счет масштабов производства значительно сокращается себестоимость единицы продукции, с другой — проектировщику необходимо задать четкие параметры будущего изделия.
 Сборный железобетон сокращает время на строительство целых зданий, но возможности модификации изделий в процессе крайне ограничены и связаны со значительными финансовыми затратами.
 Есть типы железобетонных конструкций, которые производятся только на заводах. В качестве примера — предварительно напряженный FLC.Как правило, предприятия производят только стандартную продукцию. Конечно, можно заказать индивидуальные варианты, но за уникальность приходится платить. Условно всю технологию производства можно разделить на три типа:
 конвейерная техника,
 проточно-агрегатная техника,
 стендовая техника,
 Для предварительно напряженных сборных железобетонных конструкций используются такие методы производства: растяжение в бетоне и натяжение на опорах. Арматура растягивается электромеханическим и электротермическим способом.
 Характеристики сборных железобетонных конструкций зависят от марки бетона и типа используемой арматуры. Бетон обладает такими параметрами качества:
 мороз,
 силы,
 высокой плотности,
 огнестойкость.
 Единственный недостаток бетона — плохая устойчивость к растяжению. Для противодействия использовалась фурнитура. Он может быть композитным или стальным. Форма может быть разной, но в большинстве случаев относится к ребристым стальным стержням с круглым сечением.
 В начале монтажа проверьте состояние уже установленных сборных железобетонных конструкций. Далее алгоритм процесса зависит от типа ТЛК и целей, которые преследуют строители. Тем не менее есть моменты, которые всегда присутствуют в работе:
 Обследование сборных железобетонных конструкций, установка. Строители должны следить за тем, чтобы крепления были правильно расположены, а антикоррозийное покрытие не было повреждено.Особое внимание уделяется арматуре, она не должна быть повреждена или деформирована.
 Проверенная конструкция и монтажные отверстия. Их диаметр должен соответствовать показателям в проекте. Для измерения используйте рулетку или метр.
 Сборные железобетонные конструкции исследуются на наличие трещин и провалов. Геометрическая форма изделия должна соответствовать дизайну.
 После проверки все сборные железобетонные конструкции очищаются. Деформировались при отгрузке детали прямо. Наплыв удалял бетон и счищал ржавчину (если таковая обнаружилась).
 Сборные железобетонные конструкции в процессе монтажа можно утилизировать разными способами. Захватывающие средства могут быть в виде балок, гибкого шнурка или захватных присосок.
 Совет! Удобно работать с подъемными устройствами, имеющими ступенчатый выносной крюк.
 СНиП — это свод правил, который включает в себя набор стандартов и руководств по производству, проектированию, установке и транспортировке сборных железобетонных конструкций.
 Сборные железобетонные конструкции, несмотря на высокую прочность, необходимо транспортировать в соответствии с установленными стандартами. При проектировании FLC учитывается влияние усилий, возникающих при подъеме, транспортировке и установке. Нагрузка зависит от массы и рассчитывается с использованием следующих коэффициентов:
 1.4 установка;
 1,6 транспортный;
 1,25 коэффициент динамичности.
 Последняя цифра иллюстрирует границу цифр ниже, коэффициент которой при расчете не может упасть.В противном случае надежность и долговечность сборных железобетонных конструкций будет под вопросом.
 Особое место в процессе проектирования сборных железобетонных конструкций занимают узловые и стыковые элементы. Именно от их качества зависит эксплуатационная характеристика всей проектной группы.
 В сборных железобетонных конструкциях важную роль играют петли. При их создании по СНиП 52-01-2003 было принято решение использовать горячекатаную арматурную сталь. Ее класс не должен быть ниже А240.
 Важно! При создании контуров ТЛК не применяют сталь марки Ст3пс.
 Если вам когда-либо приходилось иметь дело с монолитными железобетонными конструкциями, мы хорошо знаем, что их невозможно установить при отрицательных температурах без специального оборудования. FFA лишена такого недостатка. По СНП их можно монтировать при -40. Это не влияет на их работоспособность.
 Характеристики сборных железобетонных конструкций по СНиП ↑ 
 Особую роль в характеристиках сборных железобетонных конструкций играет арматура.Для получения оптимальных результатов необходимо точно рассчитать расстояние от стойки до стойки и диаметр арматуры. Очень важно, чтобы стальные элементы были полностью скрыты в бетоне. Для каждого типа построек предусмотрены специальные настройки защитного слоя:
 Уровень влажности средний или низкий, тип закрытого защитного слоя не менее 15 мм.
 В помещении с повышенной влажностью — 20 мм.
 На открытом воздухе — 25 мм.
 В грунт и фундамент — 35 мм.
 Для достижения желаемых качественных показателей необходимо, чтобы сборный железобетон соответствовал этим характеристикам. Уменьшение защитного слоя бетона возможно только при дополнительных мерах защиты.
 Если сборные железобетонные конструкции являются надежным защитным слоем для арматуры, существует высокий риск коррозии до того, как группа проектировщиков подвергнется коррозии. Это ставит под угрозу прочность всего здания.
 Требования к установке согласно строительным нормам ↑ 
 В здании ФЛК роль проектировщика резко возрастает.Следует с помощью специальных программ заранее рассчитать параметры будущего сооружения. По характеристикам будет произведено растение нужной формы и размера.
 Монтаж должен проходить строго по утвержденному плану. В документе прописан порядок проведения работ и дополнительные меры по обеспечению желаемой прочности. Сборные железобетонные конструкции идут прямо на объект и ставят их на место проекта.
 Проверить работоспособность ФЛК по СНиП.↑ 
 Перед тем, как отправить товар заказчику или поставить его на стрим, проходит комплекс сложных тестов. В процессе испытания проверены следующие характеристики:
 устойчивость к растрескиванию;
 эксплуатационная пригодность;
 Общая оценка пригодности.
 Испытания проходят путем изменения нагрузки на сборную бетонную конструкцию. В некоторых случаях юниты специально уничтожаются, чтобы узнать предельные значения силы.
 Обычно в партию берут несколько товаров, и они подвергаются разного рода испытаниям.Выбор последнего во многом зависит от назначения сборных железобетонных конструкций. Оценка пригодности состоит из таких показателей, как:
 толщина защитного слоя;
 прочность сварных соединений;
 геометрические размеры сечений и расположение арматуры;
 прочность сварных швов;
 механических свойств арматуры;
 размер изделия.
 На основании этих показателей проводится оценка всей партии и принимается решение о ее пригодности.
 Сборные железобетонные конструкции производятся на заводах. В то время это дало значительный импульс общей индустриализации отрасли. FLC можно устанавливать в любую погоду, а стоимость находится на доступном уровне.
 Связанные с контентом
 Новое понимание инструмента CRISPR-Cas9 может улучшить редактирование генов 
 Трехмерная структура базового редактора, состоящая из белка Cas9 (белый и серый), который связывается с мишенью ДНК (бирюзовая и синяя спираль), комплементарной к направляющей РНК (фиолетовый), и белков дезаминазы (красный и розовый) , которые заменяют один нуклеотид другим.(Графика Калифорнийского университета в Беркли, Гэвин Нотт и Одроне Лапинайте)
 Всего за восемь лет CRISPR-Cas9 стал основным редактором генома как для фундаментальных исследований, так и для генной терапии. Но CRISPR-Cas9 также породил другие потенциально мощные инструменты для манипулирования ДНК, которые могут помочь исправить генетические мутации, ответственные за наследственные заболевания.
 Исследователи из Калифорнийского университета в Беркли получили первую трехмерную структуру одного из самых многообещающих из этих инструментов: базовых редакторов, которые связываются с ДНК и вместо того, чтобы разрезать, точно заменяют один нуклеотид другим.
 Созданные четыре года назад редакторы баз уже используются в попытках исправить однонуклеотидные мутации в геноме человека. Доступные сейчас редакторы баз могут лечить около 60% всех известных генетических заболеваний — потенциально более 15 000 наследственных заболеваний — вызванных мутацией только в одном нуклеотиде.
 Подробная трехмерная структура, описанная в выпуске журнала  Science  от 31 июля, представляет собой дорожную карту для настройки базовых редакторов, чтобы сделать их более универсальными и управляемыми для использования у пациентов.
 «Мы впервые смогли наблюдать за работой базового редактора», — сказал научный сотрудник Калифорнийского университета в Беркли Гэвин Нотт. «Теперь мы можем не только понять, когда это работает, а когда нет, но и разработать следующее поколение базовых редакторов, чтобы сделать их еще лучше и более подходящими с клинической точки зрения».
 Базовый редактор — это тип слитого белка Cas9, который использует частично деактивированный Cas9 — его ножницы отключены, так что он разрезает только одну цепь ДНК — и фермент, который, например, активирует или заглушает ген или модифицирует соседние области ДНК.Поскольку новое исследование сообщает о первой структуре слитого белка Cas9, оно может помочь в изобретении множества других инструментов для редактирования генов на основе Cas9.
 «На самом деле мы впервые видим, что базовые редакторы ведут себя как два независимых модуля: у вас есть модуль Cas9, который дает вам специфичность, а затем у вас есть каталитический модуль, который обеспечивает вас деятельностью», — сказал Одроне Лапинайте, бывший UC Постдокторант Беркли, ныне доцент Университета штата Аризона в Темпе.«Структуры, которые мы получили от этого базового редактора, связанного с его целью, действительно дают нам возможность думать о слитых белках Cas9 в целом, давая нам представление о том, какая область Cas9 более полезна для слияния других белков».
 Лапинаайт и Нотт, которые недавно приняли должность научного сотрудника в Университете Монаша в Австралии, являются соавторами статьи.
 «Эта структура помогает нам понять базовые редакторы на гораздо более глубоком уровне», — сказала старший автор Дженнифер Дудна, профессор молекулярной и клеточной биологии и химии Калифорнийского университета в Беркли и исследователь Медицинского института Говарда Хьюза.«Теперь, когда мы видим, с чем работаем, мы можем разработать обоснованные стратегии для улучшения системы».
 Редактирование одной базы за раз 
 В 2012 году исследователи впервые показали, как реинжиниринг бактериального фермента Cas9 и превратить его в инструмент редактирования генов во всех типах клеток, от бактериальных до человеческих. Детище Дудны и ее французского коллеги Эммануэль Шарпантье, CRISPR-Cas9 трансформировало биологические исследования и впервые за десятилетия принесло в клинику генную терапию.
 Трехмерная структура основного редактора, редактирующего участок ДНК. (Рисунок Гэвина Нотта, Калифорнийский университет в Беркли)
 Ученые быстро использовали Cas9 для создания множества других инструментов. По сути, смесь белка и РНК, Cas9 точно нацеливается на определенный участок ДНК, а затем точно отрезает его, как ножницы. Однако функция ножниц может быть нарушена, что позволяет Cas9 нацеливаться и связывать ДНК без разрезания. Таким образом, Cas9 может переносить различные ферменты в целевые области ДНК, позволяя ферментам манипулировать генами.
 В 2016 году Дэвид Лю из Гарвардского университета и Института Броуда Массачусетского технологического института и Гарварда объединили Cas9 с другим бактериальным белком, чтобы обеспечить хирургически точную замену одного нуклеотида на другой: первый редактор оснований.
 В то время как ранний редактор баз аденина был медленным, новейшая версия, названная ABE8e, работает ослепительно быстро: она выполняет почти 100% запланированных базовых изменений за 15 минут. Тем не менее, ABE8e может быть более склонным к редактированию непреднамеренных фрагментов ДНК в пробирке, потенциально создавая так называемые эффекты, не соответствующие цели.
 Недавно обнаруженная структура была получена с помощью мощного метода визуализации, называемого криоэлектронной микроскопией (криоЭМ). Анализы активности показали, почему ABE8e склонен создавать больше нецелевых изменений: белок дезаминаза, слитый с Cas9, всегда активен. Когда Cas9 прыгает по ядру, он связывает и высвобождает сотни или тысячи сегментов ДНК, прежде чем найдет намеченную цель. Прикрепленная дезаминаза, как свободная пушка, не ждет идеального совпадения и часто редактирует базу до того, как Cas9 остановится на своей конечной цели.
 Знание того, как связаны эффекторный домен и Cas9, может привести к изменению конструкции, которая делает фермент активным только тогда, когда Cas9 находит свою цель.
 «Если вы действительно хотите создать действительно специфический гибридный белок, вы должны найти способ сделать каталитический домен более частью Cas9, чтобы он чувствовал, когда Cas9 находится на правильной цели, и только тогда активируется, а не быть постоянно активным », — сказала Лапинайте.
 Структура ABE8e также указывает на два специфических изменения в белке дезаминазы, которые заставляют его работать быстрее, чем в ранней версии базового редактора ABE7.10. Эти две точечные мутации позволяют белку крепче захватывать ДНК и более эффективно заменять A на G.
 «Как структурный биолог, я действительно хочу взглянуть на молекулу и подумать о способах ее рационального улучшения. Эта структура и сопутствующая биохимия действительно дают нам эту силу », — добавил Нотт. «Теперь мы можем делать рациональные прогнозы того, как эта система будет вести себя в клетке, потому что мы можем видеть это и предсказать, как она сломается, или спрогнозировать способы ее улучшения».